[发明专利]一种桦褐孔菌三萜类单体化合物的分离纯化方法及应用

说明书

本发明公开了一种桦褐孔菌三萜类单体化合物的分离纯化方法及应用，属于中药活性成分的分离提纯技术领域，方法如下：干燥桦褐孔菌子实体用二氯甲烷溶液45℃低温水浴回流提取，提取液浓缩干燥得到粗提物；运用中压制备色谱仪进行分离，得到Fr1、Fr2、Fr3、Fr4、Fr5五个组分；组分Fr2分离纯化，组分Fr3分离纯化，得到Rf值不相同第一单体化合物、第二单体化合物、第三单体化合物、第四单体化合物和第五单体化合物，通过本发明可以实现桦褐孔菌三萜类化合物的目标制备，一次性可获得多个已知活性的桦褐孔菌三萜类单体，同时通过本发明方法得到的桦褐孔菌三萜类单体化合物能够应用于制备抗癌药物。

技术领域

本发明涉及中药活性成分的分离提纯技术领域，尤其是涉及一种桦褐孔菌三萜类单体化合物的分离纯化方法及应用。

背景技术

桦褐孔菌属于真菌门、担子菌亚门、层菌纲、非褐菌目、锈革孔菌科、褐卧孔菌属。目前桦褐孔菌的化学组成主要有三萜类、甾体类、多糖、芳香化合物，以及氨基酸和类固醇等。其中，三萜类化合物是其主要活性成分，具有抗肿瘤、抗突变、抗炎、抗病毒等多种生物活性。为了揭示以三萜类化合物为主要活性成分的中药治疗疾病的物质基础，并充分利用桦褐孔菌类单体化合物的药理活性，需要将桦褐孔菌三萜类化合物的单体进行分离纯化，但是桦褐孔菌中存在大量结构相似的三萜类化合物使得三萜类单体化合物的分离十分困难，且三萜类化合物一般只在紫外末端有吸收，这给利用高效液相色谱在线检测三萜类化合物带来了困难，因此，如何实现对桦褐孔菌中三萜类单体的分离纯化一直是困扰研发人员的难题。

由陈程和徐向群提出的桦褐孔菌子实体三萜单体的分离及鉴定，利用超声破壁处理，氯仿为溶剂对桦褐孔菌子实体中三萜单体进行提取，详见浙江理工大学学报(自然科学版)，第33卷，第2期，2015年3月，但上述技术方案存在前期处理药材过程繁琐，且冰水浴超声多次，浸泡时间长，回流时间长，次数多。分离方式为湿法上样硅胶柱分离，为常压上柱，上样量小，上样次数多，梯度洗脱流动相比例需反复更换，人工收集洗脱液，且难以保证溶剂比例，无法回收。

发明内容

本发明的一个目的是：针对现有桦褐孔菌中三萜类单体的分离纯化存在的问题，而提出了一种桦褐孔菌三萜类单体化合物的分离纯化方法。

本发明的另一个目的是通过本发明提出的桦褐孔菌三萜类单体化合物的分离纯化方法得到的桦褐孔菌三萜类单体化合物在抗癌药物中的应用。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：一种桦褐孔菌三萜类单体化合物的分离纯化方法，其特征在于，该方法包括以下步骤，且按顺序依次进行：

步骤一、将干燥桦褐孔菌子实体用3倍量二氯甲烷溶液，在45℃低温条件下，水浴回流提取2次，每次2小时，减压回收二氯甲烷后得提取液，浓缩干燥得到粗提物，所述粗提物即为干浸膏；

步骤二、将所述干浸膏加入装有目数为100目～200目硅胶G的中压制备柱色谱仪中，用体积配比为8：2的石油醚：乙酸乙酯溶液进行等度洗脱，每500mL洗脱液为一流份，收集洗脱液，经薄层色谱法检测，合并相同流份，得到五个组分，五个组分的编号分别为Fr1、Fr2、Fr3、Fr4、Fr5；

步骤三、将经步骤二得到的组分Fr2加入装有目数为300目～400目硅胶G的中压制备柱色谱仪中，用体积配比为9：1的石油醚：乙酸乙酯溶液进行等度洗脱，每200mL洗脱液为一流份，收集洗脱液，经薄层色谱法和高效液相色谱法检测，合并相同流份，得到三个组分，三个组分的编号分别为Fr2-1、Fr2-2、Fr2-3，并经薄层色谱法检测，得到Rf值不同的三种三萜类单体化合物，分别为第一单体化合物、第二单体化合物和第三单体化合物；