[发明专利]一种桦褐孔菌三萜类单体化合物的分离纯化方法及应用

权利要求书

1.一种桦褐孔菌三萜类单体化合物的分离纯化方法，其特征在于，该方法包括以下步骤，且按顺序依次进行：

步骤一、将干燥桦褐孔菌子实体用3倍量二氯甲烷溶液，在45℃低温条件下，水浴回流提取2次，每次2小时，减压回收二氯甲烷后得提取液，浓缩干燥得到粗提物，所述粗提物即为干浸膏；

步骤二、将所述干浸膏加入装有目数为100目～200目硅胶G的中压制备柱色谱仪中，用体积配比为8：2的石油醚：乙酸乙酯溶液进行等度洗脱，每500mL洗脱液为一流份，收集洗脱液，经薄层色谱法检测，合并相同流份，得到五个组分，五个组分的编号分别为Fr1、Fr2、Fr3、Fr4、Fr5；

步骤三、将经步骤二得到的组分Fr2加入装有目数为300目～400目硅胶G的中压制备柱色谱仪中，用体积配比为9：1的石油醚：乙酸乙酯溶液进行等度洗脱，每200mL洗脱液为一流份，收集洗脱液，经薄层色谱法和高效液相色谱法检测，合并相同流份，得到三个组分，三个组分的编号分别为Fr2-1、Fr2-2、Fr2-3，并经薄层色谱法检测，得到Rf值不同的三种三萜类单体化合物，分别为第一单体化合物、第二单体化合物和第三单体化合物；

步骤四、将经步骤二得到的组分Fr3加入装有目数为300目～400目硅胶G的中压制备柱色谱仪中，以体积配比为6:4的石油醚：乙酸乙酯溶液进行等度洗脱，每70mL洗脱液为一流份，收集洗脱液，合并相同流份，得到三个组分，三个组分的编号分别为Fr3-1、Fr3-2、Fr3-3，经薄层色谱法和高效液相色谱法检测，重结晶得到Rf值不同的第四单体化合物和第五单体化合物，且第一单体化合物、第二单体化合物、第三单体化合物、第四单体化合物和第五单体化合物的Rf值均不相同。

2.根据权利要求1所述的桦褐孔菌三萜类单体化合物的分离纯化方法，其特征在于：所述第一单体化合物的Rf值为0.30，第二单体化合物的Rf值为0.38，第三单体化合物的Rf值为0.42，第四单体化合物的Rf值为0.21，第五单体化合物的Rf值为0.40。

3.根据权利要求1所述的桦褐孔菌三萜类单体化合物的分离纯化方法，其特征在于：所述第一单体化合物为3β-羟基羊毛甾-8,24-二烯-21-醛，第二单体化合物为桦褐孔菌醇，第三单体化合物为白桦脂醇，第四单体化合物为3β-羟基羊毛甾-8,24-二烯-21-酸，第五单体化合物为羊毛甾醇。

4.根据权利要求1所述的桦褐孔菌三萜类单体化合物的分离纯化方法，其特征在于：步骤三和步骤四中，高效液相色谱法检测的条件为：

固定相：十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱；

检测波长：210nm；

流速：0.8mL/min～1.0mL/min；

柱温：25℃～35℃；

流动相：甲醇为流动相A，水为流动相B，梯度洗脱，洗脱顺序为：

0min～20min，流动相A为90％～100％，流动相B为10％～0％；

20min～35min，流动相A为100％，流动相B为0％；

35min～36min，流动相A为90％，流动相B为10％；

36min～50min，流动相A为90％，流动相B为10％；

上述流动相A与流动相B的比例为体积比。

5.根据权利要求4所述的桦褐孔菌三萜类单体化合物的分离纯化方法，其特征在于：所述色谱柱为Agilentextend-18色谱柱。

6.根据权利要求1所述的桦褐孔菌三萜类单体化合物的分离纯化方法，其特征在于：所述步骤四中，重结晶过程采用的溶剂为甲醇溶液。