[发明专利]一种龙脑樟组织培养方法

说明书

本发明公开了一种龙脑樟组织培养方法，包括以下步骤：(1)外植体消毒：选择龙脑樟当年生枝条的顶芽茎段作为外植体并进行消毒处理；(2)初代培养：将外植体接种到初代培养基中诱导产生愈伤组织；(3)继代培养：将愈伤组织接种到继代培养基中进行继代增殖培养；(4)生根培养：将获得的组培苗接种到生根培养基中培养；(5)炼苗移栽：将生根苗移至炼苗室炼苗，完成后移栽入基质中即可。本发明以外植体消毒、初代培养、继代培养、生根培养、炼苗移栽五个步骤建立了一整套规范科学的龙脑樟组织培养方法，其中各种培养基的构建和培养条件的精确调控，均有利于龙脑樟的组织培养，对龙脑樟快繁和良种选育以及组培生产具有很好的促进作用。

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，尤其涉及一种龙脑樟组织培养方法。

背景技术

龙脑樟原产于印尼苏门答腊岛的天然龙脑香树树根，曾经是龙脑的主要来源，但是由于长期过度采伐已近枯竭，我国龙脑最早记载于南北朝，距今已有两千多年历史。龙脑樟属于重要的药用樟，通过龙脑樟可提出天然右旋龙脑，可用于生产冰片。由于合成龙脑与天然右旋龙脑的药用价值无法相比，因此需求与日俱增，供需矛盾日渐突出，可想而知龙脑樟快繁产业是一个极具前景的市场。

目前，龙脑樟主要是通过种子、扦插、组织培养等方式进行快速繁育，种子繁育最大的缺陷是后代个体变异性非常大，母株的诸多优良性状，如高龙脑含量及抗病丰产性能在后代中很难稳定延续；扦插繁育虽然能有效解决后代个体差异问题，单扦插成活率低；采用组织培养技术不仅能克服上述缺陷，同时在短期内即可获得大量优质苗木。

组织培养是将植物的细胞、器官或原生质体等，在无菌条件下，进行人工控制将其通过一系列培养，重新再生成完整植株的技术，并且在一定范围内可以按照人们的意愿调节植物的发育，这种调节只是局部的，并没有从遗传基础上进行彻底改造，因此获得的植株能保持原株各种优良性状。但是组织培养体系同样存在着不完善的问题，快繁增殖系数低、生根苗根系差、容易脱叶、感染、木质程度不够等导致田间种植成活率低等客观事实，大大限制了龙脑樟组织培养产业的发展。

发明内容

本发明目的就是为了弥补已有技术的缺陷，提供一种龙脑樟组织培养方法。

为了实现上述的目的，本发明提供以下技术方案：

一种龙脑樟组织培养方法，包括以下步骤：

(1)外植体消毒：选择龙脑樟当年生枝条的顶芽茎段作为外植体，将其洗净后送入直流静电场中处理，之后再以75％乙醇浸泡10-20秒，0.1％氯化汞浸泡8-12分钟，无菌水洗净得到处理好的外植体；

(2)初代培养：将上述外植体接种到初代培养基中，于24-28℃下培养30-40天，诱导产生愈伤组织；

(3)继代培养：从外植体诱导出的愈伤组织中选择生长较快、结构疏松的愈伤组织接种到继代培养基中进行继代增殖培养，以25-35天为一个周期，连续继代3-4个周期；

(4)生根培养：将继代培养获得的组培苗接种到生根培养基中培养20-24天；

(5)炼苗移栽：挑选生根培养获得的长势良好且健壮的生根苗移至炼苗室，在闭瓶条件下于自然光下炼苗3-5天，之后打开瓶盖继续炼苗3-5天，炼苗完成后将其根部洗净，0.1％高锰酸钾浸泡3-5分钟后移栽入基质中即可。

进一步的，所述步骤1中直流静电场电压控制为5-8万伏，处理时间为1-2小时。

进一步的，所述步骤2中初代培养基的组成为：MS基本培养基、2，4-二氯苯氧乙酸3.0mg/L、吲哚丁酸0.15mg/L、枸杞匀浆3.0g/L、琼脂6.0g/L、蔗糖28g/L，pH＝5.5-6.0。