[发明专利]一种龙脑樟组织培养方法

权利要求书

1.一种龙脑樟组织培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)外植体消毒：选择龙脑樟当年生枝条的顶芽茎段作为外植体，将其洗净后送入直流静电场中处理，之后再以75％乙醇浸泡10-20秒，0.1％氯化汞浸泡8-12分钟，无菌水洗净得到处理好的外植体；

(2)初代培养：将上述外植体接种到初代培养基中，于24-28℃下培养30-40天，诱导产生愈伤组织；

(3)继代培养：从外植体诱导出的愈伤组织中选择生长较快、结构疏松的愈伤组织接种到继代培养基中进行继代增殖培养，以25-35天为一个周期，连续继代3-4个周期；

(4)生根培养：将继代培养获得的组培苗接种到生根培养基中培养20-24天；

(5)炼苗移栽：挑选生根培养获得的长势良好且健壮的生根苗移至炼苗室，在闭瓶条件下于自然光下炼苗3-5天，之后打开瓶盖继续炼苗3-5天，炼苗完成后将其根部洗净，0.1％高锰酸钾浸泡3-5分钟后移栽入基质中即可。

2.根据权利要求1所述的龙脑樟组织培养方法，其特征在于，所述步骤1中直流静电场电压控制为5-8万伏，处理时间为1-2小时。

3.根据权利要求1所述的龙脑樟组织培养方法，其特征在于，所述步骤2中初代培养基的组成为：MS基本培养基、2，4-二氯苯氧乙酸3.0mg/L、吲哚丁酸0.15mg/L、枸杞匀浆3.0g/L、琼脂6.0g/L、蔗糖28g/L，pH＝5.5-6.0。

4.根据权利要求3所述的龙脑樟组织培养方法，其特征在于，所述枸杞匀浆的制备方法为：将新鲜枸杞洗净后加4-6倍水浸泡30-60分钟，用榨汁机粉碎后过滤得到匀浆液，再将剩余枸杞渣补水重复榨汁2-3次，合并枸杞榨汁，过滤定容制成15g/L的枸杞匀浆即可。

5.根据权利要求1所述的龙脑樟组织培养方法，其特征在于，所述步骤3中继代培养基的组成为：MS基本培养基、6-苄氨基嘌呤3.5mg/L、萘乙酸0.35mg/L、琼脂6.0g/L、蔗糖20g/L，pH＝5.6-5.9。

6.根据权利要求1所述的龙脑樟组织培养方法，其特征在于，所述步骤3中继代培养温度控制为24-26℃，并每日于2500-3500lx光照强度下光照10-12小时。

7.根据权利要求1所述的龙脑樟组织培养方法，其特征在于，所述步骤4中生根培养基的组成为：1/2MS基本培养基、吲哚丁酸0.7mg/L、吲哚-3-乙酸1.2mg/L、活性炭0.3g/L、琼脂6.0g/L、蔗糖20g/L，pH＝5.6-5.9。

8.根据权利要求1所述的龙脑樟组织培养方法，其特征在于，所述步骤4中生根培养温度控制为24-26℃，并每日于2000-3000lx光照强度下光照11-14小时。

9.根据权利要求1所述的龙脑樟组织培养方法，其特征在于，所述步骤5中基质的组成为黄心土：椰糠：泥炭土＝5：4：1。

10.根据权利要求1所述的龙脑樟组织培养方法，其特征在于，所述步骤5中移栽时选择光照和风力均较弱的早上7-10点或下午4-6点进行。