[发明专利]特异性敲除小鼠Treg细胞中Notch2基因的模型构建方法

说明书

本发明公开了一种特异性敲除小鼠Treg细胞中Notch2基因的模型构建方法，属于动物模型构建技术领域。本发明方法包括如下步骤：将Notch2^flox/flox小鼠和Foxp3‑Cre小鼠杂交后，得到基因型为Notch2^flox/+.Foxp3‑Cre⁺及Notch2^flox/+.Foxp3‑Cre^‑的两种第一代小鼠；将两种第一代小鼠进行交配，得到第二代小鼠；从第二代小鼠当中筛选出基因型为Notch2^flox/flox.FoxP3‑Cre⁺的小鼠，此基因型小鼠为在Treg细胞中特异性敲除Notch2基因的小鼠。本发明为研究Notch2基因在Treg细胞中的功能和作用机制提供了很好的研究模型。

技术领域

本发明属于动物模型构建技术领域，具体涉及特异性敲除小鼠Treg细胞中Notch2基因的模型构建方法。

背景技术

近年来研究发现，调节性T细胞(Treg细胞)抑制免疫活性功能及在自身免疫疾病中发挥重要作用。叉状头/翅膀状螺旋转录因子(FOXP3)为Treg细胞的关键转录因子，在Treg细胞失衡中起到了重要作用。Treg细胞发挥免疫调节作用依赖于FOXP3高水平稳定表达。同时，Notch2基因也在机体免疫系统中发挥重要功能，Notch2基因表达异常和/或Notch2蛋白功能异常可引起免疫细胞分化和功能障碍。

故发明一种简单易行，能够快速准确建立特异性敲除Treg细胞中Notch2基因的动物模型，可以为深入研究Treg细胞中Notch2通路相关的疾病机制提供了很好的工具，具有重要的科研和临床应用价值。

发明内容

本发明的目的在于提供一种特异性敲除小鼠Treg细胞中Notch2基因的模型构建方法，为研究Treg细胞中Notch2通路相关的疾病机制提供工具。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种特异性敲除小鼠Treg细胞中Notch2基因的模型构建方法，包括如下步骤：将Notch2^flox/flox小鼠(Notch2^flox/flox小鼠在Notch2基因外显子两端插有Loxp位点)和Foxp3-Cre小鼠(Foxp3-Cre小鼠在Foxp3基因座中插入了Cre重组酶基因)杂交后，得到基因型为Notch2^flox/+.Foxp3-Cre⁺及Notch2^flox/+.Foxp3-Cre^-的两种第一代小鼠；将两种第一代小鼠进行交配，得到第二代小鼠；从第二代小鼠当中筛选出基因型为Notch2^flox/flox.FoxP3-Cre⁺的小鼠，此基因型即为成功构建的在Treg细胞中特异性敲除Notch2基因的小鼠。

优选的，所述的模型构建方法中，从第二代小鼠当中筛选出基因型为Notch2^flox/flox.FoxP3-Cre⁺小鼠的方法为PCR方法，所用引物序列如下：

Notch2^flox/flox上游引物：5'-CAACCCCAGATAGGAAGCAG-3'；

Notch2^flox/flox下游引物：5'-GAGCCTTTTCCCCATATTCC-3'；

Foxp3-Cre上游引物：5'-GTGTGACTGCATGACTAACTTTGA-3'；

Foxp3-Cre下游引物：5'-TGGCTGGACCAATGTGAAC-3'。