[发明专利]特异性敲除小鼠Treg细胞中Notch2基因的模型构建方法有效
| 申请号： | 202110520171.7 | 申请日： | 2021-05-13 |
| 公开（公告）号： | CN113337540B | 公开（公告）日： | 2022-06-14 |
| 发明（设计）人： | 陈始明;华清泉;焦沃尔;谯月龙;续珊;杨蕊;邹游;汪斌如 | 申请（专利权）人： | 武汉大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/12;A01K67/027 |
| 代理公司： | 武汉科皓知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 42222 | 代理人： | 常海涛 |
| 地址： | 430072 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 特异性 小鼠 treg 细胞 notch2 基因 模型 构建 方法 | ||
1.一种特异性敲除小鼠Treg细胞中Notch2基因的模型构建方法，其特征在于：包括如下步骤：将Notch2flox/flox小鼠和Foxp3-Cre小鼠杂交后，得到基因型为Notch2flox/+.Foxp3-Cre+及Notch2flox/+.Foxp3-Cre-的两种第一代小鼠；将两种第一代小鼠进行交配，得到第二代小鼠；从第二代小鼠当中筛选出基因型为Notch2flox/flox.FoxP3-Cre+的小鼠，此基因型小鼠为在Treg细胞中特异性敲除Notch2基因的小鼠。
2.根据权利要求1所述的特异性敲除小鼠Treg细胞中Notch2基因的模型构建方法，其特征在于：从第二代小鼠当中筛选出基因型为Notch2flox/flox.FoxP3-Cre+小鼠的方法为PCR方法，所用引物序列如下：
Notch2flox/flox上游引物：5'-CAACCCCAGATAGGAAGCAG-3'；
Notch2flox/flox下游引物：5'-GAGCCTTTTCCCCATATTCC-3'；
Foxp3-Cre上游引物：5'-GTGTGACTGCATGACTAACTTTGA-3'；
Foxp3-Cre下游引物：5'-TGGCTGGACCAATGTGAAC-3'。
3.根据权利要求2所述的特异性敲除小鼠Treg细胞中Notch2基因的模型构建方法，其特征在于：以第二代小鼠的基因组DNA为模板进行PCR扩增，满足下述要求的小鼠为在Treg细胞中特异性敲除Notch2基因的小鼠：使用Notch2flox/flox上游引物和下游引物扩增得到1条240bp的条带，且使用Foxp3-Cre上游引物和下游引物扩增得到1条511bp的条带。
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