[发明专利]搭载间充质干细胞外泌体的细胞外基质凝胶及其制备方法

权利要求书

1.搭载间充质干细胞外泌体的细胞外基质凝胶，其特征在于：将间充质干细胞外泌体与细胞外基质、甲基丙烯酰化凝胶混合，加入0.25％LAP后，经紫外光固化。

2.根据权利要求1所述的搭载间充质干细胞外泌体的细胞外基质凝胶，其特征在于：所述的间充质干细胞外泌体提取方式包括差速离心法、密度梯度离心法、超滤法、沉淀法、免疫分离法、筛分离法。

3.根据权利要求1所述的搭载间充质干细胞外泌体的细胞外基质凝胶，其特征在于：所述细胞外基质包括软骨细胞外基质、骨膜细胞外基质、肌腱细胞外基质。

4.根据权利要求1所述的搭载间充质干细胞外泌体的细胞外基质凝胶，其特征在于：所述的间充质干细胞外泌体提取方式为采用差速离心+超滤法。

5.根据权利要求1所述的搭载间充质干细胞外泌体的细胞外基质凝胶，其特征在于：所述细胞外基质采用软骨细胞外基质。

6.根据权利要求1所述的搭载间充质干细胞外泌体的细胞外基质凝胶，其特征在于：所述细胞外基质、甲基丙烯酰化凝胶混合浓度为细胞外基质1-10％，甲基丙烯酰化凝胶8-15％，单位皆为w/v。

7.根据权利要求1所述的搭载间充质干细胞外泌体的细胞外基质凝胶，其特征在于：细胞外基质浓度为1-3％，甲基丙烯酰化凝胶浓度为10％，单位皆为w/v。

8.根据权利要求1所述的搭载间充质干细胞外泌体的细胞外基质凝胶的制备方法，其特征在于，该方法具体包括以下步骤：

步骤一：当骨髓间充质干细胞融合度达到50-60％时，将其洗涤并在无血清培养基中再培养48小时；

步骤二：收集培养基，通过差速离心法、密度梯度离心法、超滤法、沉淀法、免疫分离法、筛分离法中的多种进行处理；

步骤三：将沉淀用PBS重悬，进行外泌体蛋白定量；

步骤四：将骨膜、软骨或肌腱进行3次反复冻融，并使用1％Triton X-100洗脱24小时；

步骤五：将洗脱后骨膜、软骨或肌腱经1％SDS洗脱24小时，并使用DNAse I处理12h小时；

步骤六：将脱细胞后的骨膜、软骨或肌腱冻干后磨粉，并经蛋白酶消化至透亮；

步骤七：将骨膜、软骨或肌腱的细胞外基质、GelMA、外泌体蛋白按1-10％：8-15％：0.1％-2.0％混合，外泌体蛋白来源于间充质干细胞外泌体，实际加入为间充质干细胞外泌体，加入0.25％LAP后经405nm紫外光固化，单位皆为w/v。