[发明专利]一种临床前类风湿关节炎(Pre-RA)小鼠模型

说明书

本发明公开了一种临床前类风湿关节炎(Pre‑RA)小鼠模型，包括小鼠造模方式和造模剂，所述造模方式包括具体造模步骤，所述造模剂包括2‑4mg/mlⅡ型牛胶原+含2.5mg/ml结核杆菌的完全弗氏佐剂和无结核杆菌的不完全弗氏佐剂；本发明通过改造实验步骤和方法获得一种具有Pre‑RA特点的小鼠模型，用于临床前的实验研究。本发明通过配制新的乳化剂，尾根部注射后，可以维持小鼠免疫激活或产生轻微关节炎症状模拟类风湿关节炎患者临床前期的病理特点，用于临床前类风湿关节炎的相关研究。

技术领域

本发明涉及小鼠模型制备领域，具体是一种临床前类风湿关节炎(Pre-RA)小鼠模型。

背景技术

类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种病因不明的侵蚀性、对称性多关节炎。其主要发生过程是个体丧失自我耐受性，自身抗体产生，形成的一种慢性关节炎。该关节炎以全身炎症、关节持续滑膜炎、软骨破坏和骨破坏为主要表现。患病人数约占总人数的1％人口，主要发病于老年女性，女性约为男性的三倍。不予治疗，其２年的致残率约为60%。长期的慢性炎症，也可导致多种并发症的发生，危机全身各系统，严重影响患者的生活质量，为个人和家庭带来巨大的经济负担。RA病因目前尚不明确，可能与遗传、感染等因素有关。ACCP、RA等抗体具有较高诊断特异性，但无金标准。RA从发病经历了一个漫长的发展阶段，一般可经历At risk、Pre-symptomatic RA 、Transition to symptomatic RA、symptomatic RA、Rheumatoid arthritis五个阶段。抗体阳性可持续3～10年发病。目前其诊断沿用美国风湿病学院（ACR）1987标准，早期诊断沿用美国风湿病学院（ACR）2010标准。其治疗关键在控制或延迟疾病发展，主要药物有非甾体抗炎药、抗风湿药、激素、生物制剂和小分子靶向药等。通过慢病管理，增加早期诊断，研发新药等方式RA的治疗水平明显提高，但目前治疗仅限于控制或延缓病程，并不能治愈，其并发症也会随病程延展而增加。即使是最有效的疗法也不会逆转关节损伤，其中软骨损伤比骨质损伤对不可逆性残疾的贡献更大。

CIA是RA疾病的重要模型，通过注射Ⅱ型胶原、弗氏佐剂和结核杆菌，对具有较强免疫体系的小鼠（例如BDA/1、C57）造模，21-27天获得关节炎模型。CIA与人类RA有着许多相似之处，已成为RA研究最广泛的模型。CIA的免疫发病机制涉及对II型胶原（CII）的T细胞和B细胞特异性反应。CII是软骨和RA靶组织中的主要蛋白质，CⅡ进入血液后，被免疫细胞识别激活CD4+的细胞可能是CIA发病的关键。完全弗氏佐剂（CFA）中乳化的CII免疫，在遗传易感小鼠品系中诱发CIA。发病机制与RA共很多病理特征一致，其中包括滑膜增生，单核细胞浸润，软骨降解。且与RA一样，易感性与特定MHC II类基因的表达有关。CIA模型与RA之间的最显着的区别是类风湿因子（EF）不存阳性。同样的早期CIA模型中有报道，科学家通过单次注射Ⅱ型胶原、弗氏佐剂和结核杆菌，获得的关节炎模型和两次免疫后的模型病理上相似，但症状轻且发展缓慢。在4～5周的出模率在2～50%。单次注射免疫后的小鼠接近于Pre-CIA模型，此时具有全身的炎症和免疫应答，但关节的炎症相对不足，在5周以后CIA可发病升高，但关节肿胀不如CIA。有文献指出，单次注射免疫后可以用于关节炎临床前的药物筛选。RA中软骨破坏是一个较为复杂的病变过程，一方面，在软骨机械或者炎症损伤后，软骨的残端会降解Ⅱ型胶原，Ⅱ型胶原端口的氨基酸随着毛细血管进入血液，血液中免疫细胞发现，并形成抗体，在血液中的抗体经过毛细血管回到软骨，对软骨形成进一步破坏。同样，另一方面随着炎症的加剧，免疫细胞分泌包括IL-1β、IL-6、IL-8、IL-17和TNFα等促炎因子，这些因子通过血管到达软骨表面，在滑膜中和软骨上附着，促进基质蛋白酶（如MMPs和ADAMTS）表达，进一步降解软骨基质。炎症因子持续的刺激，关节腔正常的滑膜组织免疫不耐受后自限性被打破，大量的滑膜增生形成滑膜炎，滑膜炎又进一步分泌炎症因子，破坏软骨。CIA直接通过Ⅱ型胶原刺激，诱发关节炎的炎症，与RA软骨破坏形成过程十分相似。