[发明专利]一种表达A型塞内卡病毒结构蛋白的方法有效
| 申请号： | 202110515657.1 | 申请日： | 2021-05-12 |
| 公开（公告）号： | CN113248574B | 公开（公告）日： | 2023-06-13 |
| 发明（设计）人： | 郑海学;茹毅;伍春平;马坤;刘华南;张贵财;郝荣增;李亚军;李丹;刘永杰;杨帆;田宏;张克山;曹伟军;刘湘涛 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院兰州兽医研究所 |
| 主分类号： | C07K14/085 | 分类号： | C07K14/085;C12N15/70;C12N15/62;C07K1/22;A61K39/125;A61P31/14 |
| 代理公司： | 北京力量专利代理事务所(特殊普通合伙) 11504 | 代理人： | 戴治娟 |
| 地址： | 730046 *** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 表达 型塞内卡 病毒 结构 蛋白 方法 | ||
1.一种可溶性表达A型塞内卡病毒结构蛋白的基因工程菌的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)设计编码融合标签蛋白基因序列THS，其中T为翻译起始区核苷酸序列，H为编码含组氨酸标签的核苷酸序列，S为编码含酿酒酵母小泛素样修饰蛋白(SUMO)的核苷酸序列；
(2)将步骤(1)所述的融合标签蛋白基因序列THS分别与编码A型塞内卡病毒结构蛋白VP0、VP3和VP1的基因串联，形成三段融合目标蛋白基因序列THS-VP0、THS-VP3和THS-VP1；
(3)通过分子克隆技术将步骤(2)所述THS-VP0、THS-VP3和THS-VP1同时克隆入原核表达载体中，获得重组表达质粒pET-SVA-VP031；
(4)构建表达分子伴侣的质粒，将表达分子伴侣的质粒和步骤(3)所述的重组表达质粒pET-SVA-VP031转化大肠杆菌，获得基因工程菌；
所述分子伴侣为groEL蛋白、groES蛋白组合，或groEL蛋白、groES蛋白、Trigger factor蛋白组合，或DnaK蛋白、DnaJ蛋白、groEL蛋白、groES蛋白组合，或DnaK蛋白、Dn aJ蛋白、groEL蛋白、groES蛋白、GrpE蛋白组合。
2.一种可溶性表达A型塞内卡病毒结构蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括：
a.将根据权利要求1所述方法构建获得基因工程菌进行发酵培养，诱导表达带有融合标签蛋白的塞内卡病毒结构蛋白；
b.破碎基因工程菌菌体后，回收上清液，亲和色谱层析分离纯化获得带有融合标签蛋白的塞内卡病毒结构蛋白；
c.酶切去除步骤b所述结构蛋白中的融合标签蛋白，再用亲和色谱层析分离纯化获得塞内卡病毒结构蛋白。
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