[发明专利]协同靶向肝脏递送LDLR的重组基因集、载体组、外泌体及构建方法和应用

权利要求书

1.协同靶向肝脏递送LDLR的重组基因集，其特征在于，所述重组基因集包括第一重组基因和第二重组基因；所述第一重组基因从5’端至3’端包括依次连接的IRES片段、LDLR片段和MS2片段；所述第二重组基因从5’端至3’端包括依次连接的kozak片段、CD63第一片段、Apoa1片段、CD63第二片段和MCP片段；

所述IRES片段的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；所述LDLR片段的核苷酸序列如SEQID No.4所示；所述MS2片段的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示；所述kozak片段的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示；所述CD63第一片段的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示；所述Apoa1片段的核苷酸序列如SEQ ID No.8所示；所述CD63第二片段的核苷酸序列如SEQ ID No.9所示；所述MCP片段的核苷酸序列如SEQ ID No.10所示。

2.根据权利要求1所述重组基因集，其特征在于，所述第一重组基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；所述第二重组基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

3.根据权利要求1所述重组基因集，其特征在于，在所述第一重组基因的5’端还包括酶切位点Pme1，3’端还包括酶切位点BstBI；在所述第二重组基因的5’端还包括酶切位点Pme1，3’端还包括酶切位点BstBI。

4.根据权利要求3所述重组基因集，其特征在于，所述第一重组基因的核苷酸序列如SEQ ID No.11所示；所述第二重组基因的核苷酸序列如SEQ ID No.12所示。

5.一种包括权利要求1～4任一项所述重组基因集的重组表达载体组，其特征在于，所述重组表达载体组包括第一重组表达载体和第二重组表达载体；所述第一重组载体包括第一重组基因；所述第二重组载体包括第二重组基因；所述重组表达载体组的基础质粒包括pWPI。

6.一种靶向肝脏的外泌体，其特征在于，所述外泌体的编码基因序列包括权利要求1～4任一项所述重组基因集或权利要求5所述重组表达载体组。

7.权利要求6所述外泌体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

将权利要求5所述重组表达载体组共转染工具细胞后，包装成慢病毒，利用所述慢病毒感染肝脏细胞，得外泌体。

8.根据权利要求7所述构建方法，其特征在于，所述共转染包括将所述重组表达载体组与转染试剂和工具细胞混合，所述重组表达载体组与转染试剂的质量体积比为3μg：6μL。

9.权利要求1～4任一项所述重组基因集、权利要求5所述重组表达载体组、权利要求6所述外泌体或利用权利要求7或8所述构建方法制备得到的外泌体在制备治疗高脂血症和动脉粥样硬化药物中的应用。