[发明专利]RXR酵母转录激活系统及其加标沉积物毒理实验方法

权利要求书

1.基于RXR酵母转录激活系统的加标沉积物毒理实验方法，其特征在于

所述的RXR酵母转录激活系统包含pGBT9-RXRa酵母表达质粒和pGADT7-RXRa酵母表达质粒，所用宿主细胞为酿酒酵母Y187菌株；

所述两种酵母表达质粒所用载体分别为pGBT9与pGADT7，其中，pGBT9载体含有GAL4因子的DNA结合结构域以及营养缺陷型筛选标记Trp，pGADT7载体含有GAL4因子的激活结构域以及营养缺陷型筛选标记Leu；

所述的pGBT9-RXRa与pGADT7-RXRa酵母表达质粒均融合了序列为SEQ ID No.1的栉孔扇贝维甲酸X受体基因RXRa；

所述的加标沉积物毒理实验方法包括以下步骤：

（1）制备沉积物洗出液：

（1.1）阴性对照组空白沉积物洗出液的制备

将取自海洋的空白沉积物样品与YPDA酵母培养基混合置于烧杯中，磁力搅拌器搅拌后将其静置，吸出上清液并离心以进一步去除杂质，过滤去除杂菌后用作下一步实验；

（1.2）有机锡加标沉积物洗出液的制备

将有机锡用丙酮进行梯度稀释，将空白沉积物样品与有机锡稀释溶液混合均匀并静置，静置使有机溶剂蒸发，依次得到梯度浓度的有机锡加标沉积物；

随后与YPDA培养基混合置于烧杯中，磁力搅拌器搅拌后将其静置，吸出上清液并离心以进一步去除杂质，过滤去除杂菌后，得到用作下一步实验的不同浓度的有机锡加标沉积物洗出液；

（2）利用制备的加标沉积物洗出液检测其激活效应：

（2.1）将上述RXR酵母转录激活系统于YPDA酵母培养基中培养，分别与不同浓度的有机锡加标沉积物洗出液混合振荡诱导培养；

（2.2）待诱导培养结束，液氮冻融使酵母内容物释放，加入邻硝基苯-β-D-半乳糖苷溶液，通过测定Y187酵母菌株中双拷贝Lac Z基因编码的β-半乳糖苷酶的活性来表征待测有机锡加标沉积物对酵母转录激活系统的诱导效应。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于作为待测化学品的有机锡加标沉积物洗出液中，有机锡包括TBT、TPT、TBTO、TPrT。