[发明专利]针对PD-1和TGF-β的双功能蛋白

说明书

本申请提供了针对PD‑1和TGF‑β的双功能蛋白，以及该双功能蛋白的医学用途和制备方法。

技术领域

本申请大体涉及抗体药物领域，特别是恶性肿瘤的治疗。具体而言，本申请提供了能够结合PD-1（程序性死亡受体-1）和TGF-β（转化生长因子-β）的双功能蛋白，以及该双功能蛋白的医学用途。

背景技术

T细胞表达许多重要的膜蛋白免疫分子，其中PD-1（Programmed Death-1，程序性死亡受体-1，也称为CD279）蛋白，属于免疫球蛋白超家族中CD28家族，其配体（PD-L1、PD-L2）属于B7家族。PD-L1与PD-1结合后负调控T细胞免疫功能，是重要的外周T细胞抑制性免疫检查点。正常人体组织中低表达PD-L1，以维持免疫耐受、避免自身免疫反应。但肿瘤细胞通过高表达PD-L1（或释放PD-L1可溶性变体、外泌体）抑制T细胞免疫功能，形成免疫抑制型肿瘤免疫微环境。通过阻断PD-1/PD-L1信号通路，可以恢复T细胞免疫功能，对肿瘤细胞进行识别和杀伤。

TGF-β（transforming growth factor-β，转化生长因子-β）是一类具有多功能生物活性的细胞因子，能够通过调节细胞的增殖、分化、凋亡、粘附、侵袭和微环境来调节机体的生理过程。典型的TGF-β信号通路首先是TGF-β与Ⅱ型TGF-β受体（TGF-βRII）结合，然后与Ⅰ型TGF-β受体（TGFβRI）形成复合物使之激活，TGFβRI磷酸化激活R-Smad（Smad1、2、3、5、8）成员，R-Smad再与Co-Smad（Smad4）结合形成复合物转入细胞核内调控靶基因的转录。

在肿瘤微环境中，TGF-β的高表达往往与侵袭、转移、免疫逃逸、治疗抵抗和较差的预后相关联（David Charles J et al,. TGF-β Tumor Suppression through a LethalEMT.[J]. Cell,2016,164(5)）。还有研究表明，TGF-β很可能通过诱导Treg细胞和抑制效应T细胞破坏肿瘤微环境，加速肿瘤的进展（Shen Yinan et al, TGF-β regulateshepatocellular carcinoma progression by inducing Treg cell polarization.[J].Cellular physiology and biochemistry,2015,35(4)）。还有学者认为，TGF-β信号传导是导致患者产生抗PD-(L)1药物耐药性的原因。

目前，以TGF-β和PD-1/PD-L1作为联合靶点的研究已有报道，但是由于此研究方向具有良好前景，进一步的研究是亟需的。

发明内容

第一方面，本申请提供了双功能蛋白，其包含PD-1（程序性死亡受体-1）结合部和TGF-β（转化生长因子-β）结合部。

在一些实施方案中，PD-1结合部为抗PD-1抗体或抗原结合片段。在一些实施方中，PD-1结合部为针对PD-1的全长抗体、Fab片段、F(ab')₂片段、Fv片段或单链Fv片段(scFv)。