[发明专利]M13噬菌体纳米探针及其制备方法

权利要求书

1.一种M13噬菌体纳米探针，其特征在于，所述M13噬菌体纳米探针是先将病毒的亲和多肽展示在辅助噬菌体M13KO7的P3蛋白N端，将金纳米粒子的亲和多肽-Cys-Cys-展示在P8蛋白N端得到改造后的辅助噬菌体M13KO7，然后用改造后的辅助噬菌体M13KO7感染含有噬菌粒的菌液，使改造后的辅助噬菌体M13KO7包装噬菌粒，组装成50-100nm的噬菌体纳米探针。

2.根据权利要求1所述的M13噬菌体纳米探针，其特征在于，所述病毒为猪流行性腹泻病毒、流感病毒、新城疫病毒或蓝耳病毒。

3.根据权利要求1所述的M13噬菌体纳米探针，其特征在于，所述病毒的亲和多肽为AGWYCTEVLCVQ。

4.根据权利要求1所述的M13噬菌体纳米探针，其特征在于，所述噬菌粒含有复制起始点ori(+)和包装信号序列片段，所述片段序列如SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：8所示。

5.权利要求1-4任一项所述的M13噬菌体纳米探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）辅助噬菌体M13KO7的P3蛋白N端的改造：利用同源重组将病毒的亲和多肽基因序列插入至辅助噬菌体M13KO7 P3基因序列的N端表达获得阳性克隆；

2）辅助噬菌体M13KO7的P8蛋白N端的改造：在步骤1）获得阳性克隆后利用同源重组将金纳米粒子的亲和多肽序列-Cys-Cys-插入至辅助噬菌体M13KO7 P8基因序列的N端，筛选获得病毒和纳米粒子的双亲和辅助噬菌体M13KO7；

3）噬菌粒的构建：利用PCR技术扩增M13噬菌体复制起始点ori(+)和包装信号序列片段，所得片段产物经拼接后插入至载体pUC57，获得噬菌粒；

4）噬菌体纳米探针制备：将步骤3）获得的噬菌粒转化至大肠杆菌培养得到含有噬菌粒的菌液，加入步骤2）的病毒和纳米粒子的双亲和辅助噬菌体M13KO7，使改造后的辅助噬菌体M13KO7包装噬菌粒，组装成50-100nm的噬菌体纳米探针。

6.根据权利要求5所述的M13噬菌体纳米探针的制备方法，其特征在于，所述步骤1）的辅助噬菌体M13KO7的P3蛋白N端的改造是以M13KO7为扩增模板，通过引物对F3和R1扩增获得PEDV亲和多肽碱基序列的片段1，利用引物对F3和R3扩增得到含有PEDV亲和多肽碱基序列的片段2，将片段1和片段2经胶回收试剂盒纯化后，用同源重组酶连接，转化得到阳性克隆，所述F3、R3、R1序列分别如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示。

7.根据权利要求5所述的M13噬菌体纳米探针的制备方法，其特征在于，所述步骤2）的辅助噬菌体M13KO7的P8蛋白N端的改造是将步骤1）的阳性克隆为模板通过引物对F5和R1扩增出含有亲和金纳米材料多肽碱基序列的片段3，利用引物F2和R5扩增出含有亲和金纳米材料多肽碱基序列的片段4，将片段3和片段4经胶回收试剂盒纯化后，用同源重组酶连接，转化得到阳性克隆，所述R1、F5、F2、R5序列分别如SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示。

8.根据权利要求7所述的M13噬菌体纳米探针的制备方法，其特征在于，所述步骤4）的噬菌粒的菌液浓度为2 .5×10⁸~4×10⁸CFU/mL。