[发明专利]基于邻位触及催化发卡探针自组装和金属有机框架的靶序列lncARSR电化学检测方法

说明书

本发明公开了一种基于邻位触及催化发卡探针自组装和金属有机框架的靶序列lncARSR电化学检测方法，属于分子诊断技术领域，包含：针对靶序列lncARSR，程序化设计并化学合成检测探针H1和H2作为识别元件和放大元件，将检测探针H1滴加于金电极表面并在4℃冰箱孵育；将检测探针H2和靶序列lncARSR滴加于金电极表面共孵育40 min后用Tris‑Hcl溶液和Tris‑Hcl吐温溶液分别冲洗电极表面，后加入负载链霉亲和素标记的碱性磷酸酶的金属有机框架并孵育40min；用DEA溶液和DEA‑吐温溶液分别冲洗电极表面后再将金电极置于DEA溶液中2 min；在进行电化学信号检测；本发明的检测方法，可实现对靶序列lncARSR进行快速、灵敏和特异的电化学传感检测。

技术领域

本发明涉及分子诊断技术领域，具体为一种基于邻位触及催化发卡探针自组装和金属有机框架的靶序列lncARSR电化学检测方法。

背景技术

据估计，2012年全球有33.8万名患者被诊断出患有肾癌，占人类癌症总负担的2-3%，这使得肾脏癌症成为第七大常见癌症；自20世纪90年代以来，肾脏的发病率癌症一直在稳步上升；因而，肾癌的新型检测技术开发具有重要临床价值。

研究显示，lncARSR除在肾癌的发生和发展扮演重要角色外，亦具有肾癌的组织特异性和癌症特异性，是重要的、特异性的肾癌诊断生物标志物；传统lncARSR检测方法，存在缺乏灵敏度、多步操作导致检测效率低，在实际应用中检测不便的问题。

发明内容

本发明的目的在于克服上述背景技术困难，提供一种基于邻位触及催化发卡自组装和金属有机框架的靶序列lncARSR电化学检测方法。

为达到上述目的，本发明采用的技术方案为：一种基于邻位触及催化发卡自组装和金属有机框架的靶序列lncARSR电化学检测方法，包括以下步骤：

针对靶序列lncARSR，程序化设计和合成检测探针H1和H2作为识别元件，和放大元件；

将检测探针H1滴加于金电极表面，并在4℃冰箱过夜孵育，以制备检测探针H1锚定的电化学传感界面；

将检测探针H2和靶序列lncARSR滴加于金电极表面共孵育40 min，反应后用Tris-Hcl溶液和Tris-Hcl吐温溶液分别冲洗电极表面，后加入负载链霉亲和素标记的碱性磷酸酶的金属有机框架并孵育40分钟；

然后用DEA溶液和DEA吐温溶液分别冲洗电极表面分后，将金电极置于含α-萘酚底物的DEA溶液中2 min；在扫描电压-0.1-0. 5 V间进行电化学信号检测；观察50-150bp范围是否出现目的条带；

所述靶序列lncARSR的序列为：gucuggaucucagccagcccuaagagugug；

所述探针H1的序列为：

HS-(C12)TTTTTTGTCAGCTACCATCAACCACACTCTTAG/GGCTGGCTGAGATGTTGATGGTAGCTGACG；

所述探针H2的序列为：

Biotin-GGCTGGCTGAG/CGTCAGCTACCATCAACATCTCAGCCAGCC。

进一步，所述检测探针H1环部设计靶序列lncARSR互补序列，茎部设计一段含16bp碱基的互补序列，以形成稳定的双链结构。

进一步，所述H1探针的5’端进行巯基化修饰，以使检测探针H1通过金硫键锚定于金电极表面，从而形成检测探针H1锚定的电化学传感界面。

进一步，所述检测探针H2是用检测探针H1互补对应物设计。

本发明提供的一种基于邻位触及催化发卡探针自组装和金属有机框架的靶序列lncARSR电化学检测方法，具备以下有益效果：