[发明专利]基于邻位触及催化发卡探针自组装和金属有机框架的靶序列lncARSR电化学检测方法

权利要求书

1.一种基于邻位触及催化发卡探针自组装和金属有机框架的靶序列lncARSR电化学检测方法，非以疾病诊断和治疗为目的，其特征是，包括以下步骤：

针对靶序列lncARSR，程序化设计并合成检测探针H1和H2作为识别元件和放大元件；

将检测探针H1滴加于金电极表面，并在4℃冰箱过夜孵育，通过探针H1巯基和金电极形成金硫键制备检测探针H1锚定的电化学传感界面；

将检测探针H2和靶序列lncARSR滴加于金电极表面共孵育40 min，反应后用Tris-Hcl溶液和Tris-Hcl吐温溶液分别冲洗电极表面，后加入负载链霉亲和素标记的碱性磷酸酶的金属有机框架并孵育40分钟，此步骤通过生物素-链霉亲和素反应将负载碱性磷酸酶的金属有机框连接于电极表面；

然后用DEA溶液和DEA-吐温溶液分别冲洗电极表面后，将金电极置于含α-萘酚底物的DEA溶液中2 min；碱性磷酸酶催化α-萘酚底物并在扫描电压-0.1-0. 5 V间收集电化学检测信号；

所述靶序列lncARSR的序列为：gucuggaucucagccagcccuaagagugug；

所述检测探针H1的序列为：

HS-(C₁₂)TTTTTTGTCAGCTACCATCAACCACACTCTTAG/GGCTGGCTGAGATGTTGATGGTAGCTGACG；

所述检测探针H2的序列为：

Biotin-GGCTGGCTGAG/CGTCAGCTACCATCAACATCTCAGCCAGCC。

2.根据权利要求1所述的基于邻位触及催化发卡探针自组装和金属有机框架的靶序列lncARSR电化学检测方法，其特征是：所述检测探针H1环部设计靶序列lncARSR互补序列，茎部设计一段含16 bp碱基的互补序列，以形成稳定的双链结构。

3.根据权利要求1所述的基于邻位触及催化发卡探针自组装和金属有机框架的靶序列lncARSR电化学检测方法，其特征是：所述检测探针H1的5’端进行巯基化修饰，以使检测探针H1通过金硫键锚定于金电极表面，从而形成检测探针H1锚定的电化学传感界面。

4.根据权利要求1所述的基于邻位触及催化发卡探针自组装和金属有机框架的靶序列lncARSR电化学检测方法，其特征是：所述检测探针H1环部区域和lncARSR间特殊设计一段铆钉区促使lncARSR铆钉于探针H1，从而促使探针H2作为燃料链驱动lncARSR在邻位的探针H1上连续行走，构成邻位催化发卡结构自组装的单足分子机器。

5.根据权利要求1所述的基于邻位触及催化发卡探针自组装和金属有机框架的靶序列lncARSR电化学检测方法，其特征是：所述检测探针H2是用检测探针H1互补对应物设计，且通过生物素与负载链霉亲和素标记的碱性磷酸酶的金属有机框架发生连接反应。

6.根据权利要求1所述的基于邻位触及催化发卡探针自组装和金属有机框架的靶序列lncARSR电化学检测方法，其特征是：所述检测探针H2环部设计检测探针H1茎部互补序列，其茎部设计一段检测探针H1环部序列，以执行程序化的邻位触及催化发卡结构自组装，从而作为信号放大元件。

7.根据权利要求1所述的基于邻位触及催化发卡探针自组装和金属有机框架的靶序列lncARSR电化学检测方法，其特征是：所述检测探针H1、H2，在靶序列lncARSR存在的情况下，检测探针H1作为识别元件通过环部互补序列与靶序列lncARSR进行识别和组装，形成双链结构，检测探针H2通过环部序列与检测探针H1茎部序列互补结合并组装成双链结构，此时检测探针H2茎环结构被打开，检测探针H2通过茎部序列与检测探针H1环部互补的序列进行杂交结合，从而形成稳定的H1- H2杂交组装体，并将靶序列lncARSR从检测探针H1上部分挤脱下来，而未挤脱下来部分作为铆钉区结合在H1探针；所述靶序列lncARSR从检测探针H1上挤脱下来的序列能够与邻近的金电极上锚定的H1探针的环部进行识别杂交，并逐步从原先的检测探针H1上脱离下来，从而与邻近的检测探针H1形成新的lncARSR-H1双链结构；从而构成邻位触及发卡结构自组装反应，该反应逐步将形成大量H1- H2组装体，整个过程即为所构建的自组装信号放大元件；所述H1- H2组装体的H2上标记有生物素，可通过生物素-亲和素反应将负载碱性磷酸酶标记链霉亲和素的金属有机框架捕获于金电极表面，进而催化萘酚底物发生氧化还原反应，输出放大的电流信号。