[发明专利]一种八倍体油菜转基因方法以及在基因编辑中的应用有效
| 申请号： | 202110496645.9 | 申请日： | 2021-05-07 |
| 公开（公告）号： | CN113151352B | 公开（公告）日： | 2022-09-27 |
| 发明（设计）人： | 李超;付绍红;梅德圣;王会;杨进;胡琼;李云;汪文祥;成洪涛;刘佳;孙梦丹;桑世飞;石育钦;胡学志;郝梦宇 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院油料作物研究所;成都市农林科学院;武汉中油大地希望种业有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/84 | 分类号： | C12N15/84;C12N15/53;C12N15/55;A01H4/00;A01H5/00;A01H5/10;A01H6/20;A01H1/04;A01H1/02;C12Q1/6895 |
| 代理公司： | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 李兴林 |
| 地址： | 430061 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 八倍体 油菜 转基因 方法 以及 基因 编辑 中的 应用 | ||
1.一种八倍体油菜转基因方法在遗传育种方面的应用，其特征在于，所述八倍体油菜转基因方法包括以下步骤：
（1）基因编辑载体构建；
（2）八倍体油菜种子预处理及灭菌；
（3）转化根癌农杆菌；
（4）遗传转化八倍体油菜；
所述步骤（1）中基因编辑载体中含有基因编辑功能元件，基因编辑功能元件为CRISPR/Cas9、CRISPR/Cpf1和prime editing中的任一种；
所述步骤（4）中遗传转化八倍体油菜的步骤如下：
①无菌种植培养八倍体油菜种子；
②将八倍体油菜下胚轴切成小段，并将其转移到培养完成的农杆菌菌液中进行侵染试验；
③侵染完成后，对八倍体油菜下胚轴小段进行培养；
所述应用包括如下步骤：
a.在油菜转基因后代中，鉴定筛选基因编辑元件具有活性的转基因植株，将之作为父本授粉材料；
b.使用父本授粉材料的花粉对母本进行授粉，授粉后代鉴定染色体倍性与母本倍性一致的植株；
c.与母本倍性一致的后代，通过分子标记、测序、性状鉴定筛选得到突变体植株；
d.鉴定不含转基因元件的突变体植株。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述步骤a中基因编辑功能元件为CRISPR/Cas9时，油菜转基因后代中含有基因编辑功能元件CRISPR/Cas9，从阳性转化系中筛选与非转基因对照相比Cas9表达量升高的转基因系作物授粉父本材料。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述步骤b中的母本为十字花科作物。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述基因编辑功能元件为CRISPR/Cas9时，设计2个sgRNA靶点，序列分别为：SgRNA1: GACGCCACCATTCCAACAC，SgRNA2:ACTTAGCCTTCAACGTCTC。
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