[发明专利]一种长期储存及复苏培养单个细胞的方法

说明书

本发明公开了一种长期储存及复苏培养单个细胞的方法，启动驱动电机工作，带动主动齿轮转动，主动齿轮通过啮合作用带动从动齿轮进行转动，从动齿轮上安装有连接杆，连接杆沿着竖直槽进行转动，连接杆上的第一球体也随着进行转动，当第一球体与第二球体接触再分离时，会使得第二球体上下移动，第二球体通过滑杆带动滑板上下移动，滑板使得培养皿上下振荡，使得细胞在培养皿内晃动，解决了现有技术中，无法使得细胞组织在现有的细胞培养装置内进行均匀和摇晃的运作，从而使得细胞在培养过程中效率比较低的问题；避免细胞培养温度过高或过低，且该加热机构可以对多组培养皿同时进行加热，大大提高了培养皿加热效率的优点。

技术领域

本发明属于细胞培养技术领域，涉及，具体为一种长期储存及复苏培养单个细胞的方法。

背景技术

对比文件CN105316287A公开了一种长期储存及复苏培养成人外周血单个核细胞的方法，它涉及成人外周血单个核细胞的分离及其冻存和复苏方法。方法：一、采血袋采集健康成人外周静脉血，并对其中单个核细胞进行分离纯化；二、通过添加冻存细胞所须相关冻存试剂，将分离得到的单个核细胞按照一定密度进行冻存；三、随机抽样对细胞冻存混合液进行细菌、真菌、内毒素和支原体检测；四、复苏细胞并重悬于特殊配制的细胞复苏洗液中，离心清洗两次后进一步培养。由于本发明使用的外周血单个核细胞来源于患者自身，实验用到的相关试剂均无外源性物质，不存在涉及相关伦理问题，回输后不会产生免疫排斥反应。本发明用于健康成人免疫细胞的存储，为日后进行肿瘤类相关疾病的治疗做储备。

现有技术中，无法使得细胞组织在现有的细胞培养装置内进行均匀和摇晃的运作，从而使得细胞在培养过程中效率比较低的问题；且对细胞培养时温度的设置，其结构复杂，灵敏度高，易损坏的问题。

发明内容

本发明的目的就在于为了解决现有技术中，无法使得细胞组织在现有的细胞培养装置内进行均匀和摇晃的运作，从而使得细胞在培养过程中效率比较低的问题；且对细胞培养时温度的设置，其结构复杂，灵敏度高，易损坏的问题，而提出一种长期储存及复苏培养单个细胞的方法。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

一种长期储存及复苏培养单个细胞的方法，包括以下步骤：

第一步：对得到的外周血单个核细胞进行清洗，纯化；用冻存液重悬外周血单个核细胞进行稀释，使细胞悬液密度达到1～10×10⁷个/mL；将稀释后的细胞悬液分装至1.8mL冻存管中，每管添加1mL，并留样待检，将细胞冻存管放入4℃预温的程序降温盒中，转移到-80℃冰箱暂时储存；预留的冻存细胞悬液进行细菌、真菌、内毒素和支原体等指标的检测，指标检测合格后，冻存入库做长期保存；复苏时，将从冻存入库中取出的细胞转入预温至-80℃的冻存盒内后，平衡5min转入37℃水浴融化；将融化后的细胞转移至含质量百分含量为10％人血白蛋白的生理盐水混合液中洗涤，检测细胞活率，之后将细胞重悬于含有质量百分含量为10％人血白蛋白的无血清的培养皿内；

第二步：将培养皿置于培养皿置物板11的放置槽内，再将盖板21盖上，对培养皿进行限位，然后打开培养箱的箱门，将培养皿置物板放置在外套上，培养皿置物板上的插板位于到外套的卡槽内，然后连接件的插杆插入到插板上的插槽，实现对培养皿置物板的固定；当培养结束后，通过拉动拉柄，带动滑板移动，使得插杆从插板上的插槽脱离，从而使得对培养皿置物板的拆卸；

第三步：启动驱动电机工作，带动主动齿轮转动，主动齿轮通过啮合作用带动从动齿轮进行转动，从动齿轮上安装有连接杆，连接杆沿着竖直槽进行转动，连接杆上的第一球体也随着进行转动，当第一球体与第二球体接触再分离时，会使得第二球体上下移动，第二球体通过滑杆带动滑板上下移动，滑板使得培养皿上下振荡，使得细胞在培养皿内晃动；

同时，通过循环进管向加热板注入热源，并从循环出管流出，从而对加热板进行加热，通过气缸工作，控制加热板与培养皿置物板之间的距离，从而对培养温度进行调节，培养皿置物板由导热材料制成的，吸收加热板的热量，并将热量传输到放置槽内，对培养皿进行加热，为细胞培养提供温度。