[发明专利]一种长期储存及复苏培养单个细胞的方法

权利要求书

1.一种长期储存及复苏培养单个细胞的方法，其特征在于：包括以下步骤：

第一步：对得到的外周血单个核细胞进行清洗，纯化；用冻存液重悬外周血单个核细胞进行稀释，使细胞悬液密度达到1～10×10⁷个/mL；将稀释后的细胞悬液分装至1.8mL冻存管中，每管添加1mL，并留样待检，将细胞冻存管放入4℃预温的程序降温盒中，转移到-80℃冰箱暂时储存；预留的冻存细胞悬液进行细菌、真菌、内毒素和支原体等指标的检测，指标检测合格后，冻存入库做长期保存；复苏时，将从冻存入库中取出的细胞转入预温至-80℃的冻存盒内后，平衡5min转入37℃水浴融化；将融化后的细胞转移至含质量百分含量为10％人血白蛋白的生理盐水混合液中洗涤，检测细胞活率，之后将细胞重悬于含有质量百分含量为10％人血白蛋白的无血清的培养皿（20）内；

第二步：将培养皿（20）置于培养皿置物板（11）的放置槽内，再将盖板（21）盖上，对培养皿（20）进行限位，然后打开培养箱（1）的箱门（2），将培养皿置物板（11）放置在外套（10）上，培养皿置物板（11）上的插板（8）位于到外套（10）的卡槽内，然后连接件的插杆（33）插入到插板（8）上的插槽，实现对培养皿置物板（11）的固定；

第三步：启动驱动电机（3）工作，带动主动齿轮（4）转动，主动齿轮（4）通过啮合作用带动从动齿轮（5）进行转动，从动齿轮（5）上安装有连接杆（9），连接杆（9）沿着竖直槽（28）进行转动，连接杆（9）上的第一球体（15）也随着进行转动，当第一球体（15）与第二球体（16）接触再分离时，会使得第二球体（16）上下移动，第二球体（16）通过滑杆（30）带动滑板（32）上下移动，滑板（32）使得培养皿（20）上下振荡，使得细胞在培养皿（20）内晃动；

同时，通过循环进管（13）向加热板（26）注入热源，并从循环出管（14）流出，从而对加热板（26）进行加热，通过气缸（27）工作，控制加热板（26）与培养皿置物板（11）之间的距离，从而对培养温度进行调节，培养皿置物板（11）由导热材料制成的，吸收加热板（26）的热量，并将热量传输到放置槽内，对培养皿（20）进行加热，为细胞培养提供温度。

2.根据权利要求1所述的一种长期储存及复苏培养单个细胞的方法，其特征在于，培养箱（1）的正面上方设置有箱门（2），培养箱（1）内设置有培养装置，培养装置包括振荡机构和加热机构。

3.根据权利要求2所述的一种长期储存及复苏培养单个细胞的方法，其特征在于，振荡机构包括驱动电机（3）、主动齿轮（4）、从动齿轮（5）、固定柱（6）、固定套（7）、连接杆（9）、外套（10）、固定环（12）、第一球体（15）；外套（10）通过固定环（12）安装在培养箱（1）的内壁上，外套（10）内设置有圆柱形的加热筒（22），外套（10）的内壁与加热筒（22）的外壁之间设置有环形的竖直槽（28）；培养箱（1）的底面上设置有驱动电机（3），驱动电机（3）的输出端与主动齿轮（4）连接，主动齿轮（4）与从动齿轮（5）啮合连接，从动齿轮（5）通过轴承套设在固定柱（6）的外壁上，固定柱（6）的底端与固定套（7）连接，固定套（7）安装在培养箱（1）的内壁底面上，从动齿轮（5）的顶面上对称设置有连接杆（9），连接杆（9）的顶端设置有第一球体（15）；第一球体（15）沿着竖直槽（28）转动。

4.根据权利要求3所述的一种长期储存及复苏培养单个细胞的方法，其特征在于，外套（10）的上方设置有培养皿置物板（11），培养皿置物板（11）上设置有与培养皿（20）相适配的放置槽，放置槽沿着培养皿置物板（11）环形阵列设置有多组，放置槽内滑动连接有活塞板（19），活塞板（19）的底面与滑动杆（17）的顶端连接，滑动杆（17）的底端延伸出放置槽，并与培养皿置物板（11）滑动连接，滑动杆（17）的底端与第二球体（16）连接，滑动杆（17）的外壁套设有第一弹簧（18），第一弹簧（18）的一端活塞板（19）连接，第一弹簧（18）的另一端与放置槽连接，放置槽的上方设置有盖板（21），盖板（21）由软性材料组成；第二球体（16）与第一球体（15）结构相同，第二球体（16）位于第一球体（15）的上方。