[发明专利]一种评价血清内源性化合物基质效应的分析方法

权利要求书

1.一种评价血清内源性化合物基质效应的分析方法，其特征在于：

a、收集不同来源血清样本；

b、标准溶液的配制：使用配制标准曲线的基质溶解低值和高值两个不同浓度水平的目标物溶液；

c、混合样本的制备：分别将标准溶液和不同来源血清样本按1：1比例进行混合；

d、将标准溶液、不同来源血清样本和混合样本进行前处理；

e、测定：将上述三种溶液注入液相色谱串联质谱系统进行分析，得到三种溶液的面积比，待测物峰面积比/待测物同位素内标峰面积比；

f、采用计算公式ME％＝(A-B)/B*100％进行相对误差计算；其中ME％为血清与标准溶液相对基质效应，A为混合样本检测的面积比，B为(血清样本面积比+标准溶液面积比)/2；

g、ME％的判定：20％≤ME％≤20％，基质效应可忽略；ME％＞20％，基质效应抑制严重；ME％＜-20％，基质效应增强严重。

2.根据权利要求1所述的一种评价血清内源性化合物基质效应的分析方法，其特征在于所述步骤b中的基质为5％BSA。

3.根据权利要求1所述的一种评价血清内源性化合物基质效应的分析方法，其特征在于所述步骤b中的目标物溶液为25羟基维生素D2和/或25羟基维生素D3；其高值浓度为20ng/mL或40ng/mL；其低值浓度为5ng/mL或10ng/mL。

4.根据权利要求1所述的一种评价血清内源性化合物基质效应的分析方法，其特征在于所述步骤d中前处理方法为：

a)移取血清样本或标准品工作液0.150mL，加入0.02ml内标工作液(浓度为200ng/mL)，充分混匀；

b)加入硫酸锌溶液0.150mL；

c)加入乙腈0.300mL；

d)剧烈震荡30s，22℃～28℃静置15min；

e)加入正已烷1.00mL；

f)剧烈震荡3min；

g)离心5min，离心力≥14000g；

h)可见样本分为三层，使用1.5ml离心管，取最上层有机层0.800mL于另一离心管中，注意不要触及中间的水层；

i)室温下氮气吹干；

j)加入75％甲醇溶液80ul；

k)充分混匀30s，离心2min，离心力≥14000g。

5.根据权利要求1所述的一种评价血清内源性化合物基质效应的分析方法，其特征在于所述步骤e中液相色谱的条件包括：

a)色谱柱：反向C18色谱柱；规格内径和理论塔板数满足使用要求；

b)流动相：流动相A为0.1％甲酸水；流动相B为0.1％甲酸甲醇；

c)流速：0.5mL/min；

d)进样量：0.010mL；

e)柱温：50℃。