[发明专利]一种羰基类代谢物的衍生化方法及非靶向代谢组学高效分析方法

权利要求书

1.一种羰基类代谢物的衍生化方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤1：待检测样品采用第一溶剂进行羰基类代谢物提取，之后进行干燥除掉第一溶剂，得到干燥样本；

步骤2：将所述干燥样本与第二溶剂混合，使所述干燥样本溶解，加入pH调节试剂调节pH，之后加入丹磺酰肼，其中，丹磺酰肼为标记试剂，混合均匀后加热进行孵育，之后降温以终止反应，干燥处理得到固体，所述固体加入所述第二溶剂进行复溶，获得衍生化样本。

2.根据权利要求1所述羰基类代谢物的衍生化方法，其特征在于：步骤1中，将待检测样品进行蛋白质沉淀处理后，进行离心处理取上清液，对所述上清液进行干燥，得到所述干燥样本；

任选的，所述第一溶剂为甲醇、水或者甲醇水溶液；

任选的，所述第二溶剂为所述衍生化样本进行液相色谱分离的洗脱剂，优选为水或者乙腈水溶液。

3.根据权利要求2所述羰基类代谢物的衍生化方法，其特征在于：步骤1中，所述待检测样品为血浆或血清样品，在3-5℃、离心力15000g的条件下离心10-20分钟，离心后取上清液，加入甲醇，进行涡旋处理，使蛋白完全沉淀，然后进行离心，取上清液，用真空离心浓缩仪将获得的上清液完全干燥，直到产物中无溶剂时即停止干燥，得到所述干燥样本；

任选的，所述待检测样品为尿液样品，在3-5℃、离心力15000g的条件下离心10-20分钟，离心后取上清液；用真空离心浓缩仪将获得的上清液完全干燥，直到产物中无溶剂时即停止干燥，得到所述干燥样本；

任选的，所述待检测样品为组织样品，将组织样品与甲醇混合，进行匀浆处理，之后置于-20℃孵育10-15分钟；孵育结束后，在3-5℃、离心力15000g的条件下离心10-20分钟，离心后取上清液；用真空离心浓缩仪将获得的上清液完全干燥，直到产物中无溶剂时即停止干燥，得到所述干燥样本；

任选的，所述待检测样品为细胞样品，最少需要10⁶个细胞，将所述细胞样品进行细胞裂解处理，得到的裂解液在3-5℃、离心力15000g的条件下离心10-20分钟，离心后取上清液；用真空离心浓缩仪将获得的上清液完全干燥，直到产物中无溶剂时即停止干燥，得到所述干燥样本。

4.根据权利要求1-3中任一项所述羰基类代谢物的衍生化方法，其特征在于：步骤2中，盐酸作为pH调节试剂调节pH＝2.0，丹磺酰肼为标记试剂，孵育的温度为30-45℃，孵育时间为50-100分钟，孵育完成之后转移至-85～-70℃环境下放置10-15分钟终止反应，干燥处理得到固体，所述固体加入所述第二溶剂进行复溶，获得所述衍生化样本。

5.根据权利要求4所述羰基类代谢物的衍生化方法，其特征在于：所述干燥处理为使用氮吹浓缩仪吹干，得到所述固体，加入乙腈水溶液进行复溶，获得所述衍生化样本。

6.一种非靶向代谢组学高效分析方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤A：将待测对象等分成至少2份，分别采用权利要求1-5任一项所述羰基类代谢物的衍生化方法，进行衍生化，其中衍生化样本a采用的所述标记试剂为¹²C标记试剂，即¹²C-丹磺酰肼；衍生化样本b采用的所述标记试剂为¹³C标记试剂，即¹³C-丹磺酰肼；

步骤B：将所述衍生化样本a和所述衍生化样本b按照1：1的体积比混合，获得检测样本；

步骤C：将步骤B获得的所述检测样本送入LC-MS装置，进行液质分析，获得代谢物的特征峰图，所述代谢物以峰对的形式呈现在所述特征峰图中，通过所述特征峰图识别所述代谢物。

7.根据权利要求6所述非靶向代谢组学高效分析方法，其特征在于：步骤C中所述液质分析的条件包括，液相色谱采用C₁₈色谱柱，流动相A为甲酸的水溶液，流动相B为甲酸和乙腈的混合溶液。

8.根据权利要求7所述非靶向代谢组学高效分析方法，其特征在于：步骤C中所述液质分析的条件包括，质谱扫描范围m/z＝220-1000。

9.根据权利要求6-8任一项所述非靶向代谢组学高效分析方法，其特征在于：步骤C中，所述特征峰图中以单峰形式存在的物质为干扰噪声，不是真实的代谢物。