[发明专利]用于检测乙肝病毒的比色传感器及其制备与应用

权利要求书

1.一种用于检测乙肝病毒的比色传感器，其特征在于，包括靶标识别部分和信号输出部分，所述靶标识别部分由乙肝表面抗体Ab与修饰有生物素的乙肝表面抗原适体

DNA biotin-aptamer组成，当靶物质乙肝表面抗原加入时，其被Ab捕获，而biotin-aptamer又与抗原结合形成三明治复合物，biotin能与后续加入的链霉亲和素结合；所述信号输出部分包括由S1、S2、S3、S4这四条修饰DNA链形成的DNA胶束-Hemin/G4复合物，所述DNA胶束-Hemin/G4复合物能够催化TMB显色，发出肉眼可见的蓝光，所述S4上修饰有生物素biotin，S4上修饰的生物素能与链霉亲和素结合，从而实现对乙肝表面抗原的检测；

所述S1的核苷酸序列为：

所述S2的核苷酸序列为：

所述S3的核苷酸序列为：

所述S4的核苷酸序列为：

所述靶物质，即乙肝表面抗原适体DNA的核苷酸序列为：

2.根据权利要求1所述的比色传感器的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(a)将含有乙肝表面抗原的反应液加入细胞培养板进行孵育，捕获靶物质，然后洗板，加入链霉亲和素，进行孵育；

(b)将S1、S2、S3、S4这四条修饰DNA链按比例混合，变性退火形成DNA胶束-Hemin/G4复合物；

(c)将DNA胶束-Hemin/G4复合物加入96孔板避光孵育，洗板后加入TMB显色液，避光孵育；

(d)加入TMB终止液，通过测量紫外吸光度检测乙肝病毒。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤(a)中，乙肝表面抗原和链霉亲和素的摩尔比为1:1。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤(a)中，所述含有乙肝表面抗原的反应液包括Tris-HCL缓冲液和乙肝表面抗原。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤(a)中，孵育温度为37℃，孵育时间为1-3h。

6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤(a)中，链霉亲和素加入后，在室温下孵育1-3h。

7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤(b)中，S1、S2、S3和S4的摩尔比为(4-6)：(4-6)：(3-5)：1。

8.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤(b)中，将S1、S2、S3和S4加入NEBuffer3.0缓冲液中，进行变性退火。

9.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤(b)中，变性温度为90-100℃，变性时间为5min。

10.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤(b)中，在冰水浴条件下进行缓慢退火。

11.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤(b)中，将退火后所得反应液超滤离心后得到提纯的DNA胶束-Hemin/G4复合物。

12.根据权利要求11所述的制备方法，其特征在于：超滤离心条件为300-500rpm、5-10min。

13.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤(c)中，TMB显色液的加入量为40-100μL。

14.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤(c)中，DNA胶束-Hemin/G4加入96孔板中，于室温避光孵育0.5-1.5h。