[发明专利]基于DNA分子检测ERGIC3 mRNA的方法

说明书

本发明公开了一种基于DNA分子检测ERGIC3 mRNA的方法，属于基因技术领域，包含以下步骤：针对靶ERGIC3 mRNA，程序化设计和合成检测探针H1、H2作为识别元件，底物探针sub作为报告元件；先将2.5μL体积的2μM探针H1、2.5μL体积的2μM探针H2和5μL体积的2μM底物探针sub移至扩增系统，再将10^‑14至10^‑8浓度的ERGIC3 mRNA加入扩增检测系统，整个反应系统在50μL 1×Nebuffer 2中进行，37℃孵育1小时；然后用M2光谱进行荧光检测，激发波长为645纳米，记录发射波长范围为655至725纳米；本发明的检测方法，可以实现对目标靶ERGIC3 mRNA进行简便、快速、灵敏、特异检测。

技术领域

本发明涉及基因分子检测技术，具体为一种基于DNA分子检测靶ERGIC3 mRNA的方法。

背景技术

ERGIC3（内质性视网膜-高尔基中间舱3）是位于内质视网膜和高尔基体内的II型转膜蛋白。主要功能是参与蛋白质从内质网到高尔基体的早期运输和糖苷酶的糖基化。有研究发现ERGIC3是新的肺癌标志物，可能对肺癌早期诊断和治疗监测展现新的应用前景。

传统分析mRNA水平方法主要包括Northern 印记、微阵列和实时聚合酶链反应。其中，Northern 印记和微阵列技术由于缺乏灵敏度和多步操作而在实际应用中受阻。定量PCR在常规的miRNA检测方面有很大的帮助，但其信号扩增需要专门的仪器，也比较麻烦。

现有技术方法尚不能对ERGIC3 mRNA进行快速、有效的检测。

发明内容

本发明的目的在于克服上述背景技术困难，提供一种基于DNA分子检测靶ERGIC3mRNA的方法。

为达到上述目的，采用的技术方案为：

一种基于DNA分子检测ERGIC3 mRNA的方法，包含以下步骤：

针对靶ERGIC3 mRNA，程序化设计和合成检测探针H1、H2作为识别元件，底物探针sub作为报告元件；

先将2.5 μL体积的2μM探针H1、2.5 μL体积的2μM探针H2和5μL体积的2 μM底物探针sub移至扩增系统，再将10^-14至10^-8浓度的ERGIC3 mRNA加入扩增检测系统，整个反应系统在50μL 1×Nebuffer 2中进行，37℃孵育1小时；

然后用M2光谱进行荧光检测，激发波长为645纳米，记录发射波长范围为655至725纳米；

所述ERGIC3的序列为：GACCAGACAUGAGAAGGUUGCCA；

单碱基错配序列：GACCAUACAUGAGAAGGAUGCCA；

双碱基错配序列：GACCAUACAUGAGAAGGAUGCCA；

非完全错配序列：AAUCGUACUUGAUCCAAUAGUU；

所述探针H1的序列为：

GGAGACTAGTTGCTGGCAACCTTCTCATGTCTGGTCGCAACTAGTCTCCACAACGAAGGTGTTACAG，

所述探针H1的序列为：

GCACATCTTCAGGCTAGCTGGAGACTAGTTGCGACCAGACATGAGAAGGATTATTACCTTCTCATGTCTGGTC

所述底物探针sub的序列为：