[发明专利]一种高产庆大霉素C组分的工程菌及其构建

权利要求书

1.一种高产庆大霉素C组分的基因，其特征在于：其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.权利要求1所述的基因在构建高产庆大霉素C组分工程菌中的应用。

3.高产庆大霉素C组分工程菌YC001、YC003和YC004，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号分别为CCTCC No.M2021345，No.M2021346，No.M2021347。

4.权利要求3所述的高产庆大霉素C组分工程菌的构建方法，其特征在于：采用位点整合或同源重组进行构建。

5.根据权利要求4所述的高产庆大霉素C组分工程菌的构建方法，其特征在于：位点整合包括以下步骤：

(1)以位点整合型质粒为载体，构建不同启动子控制GenP表达的质粒，所述质粒包括启动子、genP基因，启动子控制genP的表达；

(2)通过大肠杆菌介导的三亲本接合转移方法将所述质粒导入刺孢小单孢菌原始菌株；

(3)位点整合方式的GenP过表达菌株的筛选，首先筛选硫链丝菌素抗性菌株，后提取基因组进行PCR验证，筛选成功导入启动子-genP片段的菌株。

6.根据权利要求4所述的高产庆大霉素C组分工程菌的构建方法，其特征在于：同源重组包括以下步骤：

(1)以复制型质粒为载体，构建GenP表达的同源重组质粒，所述质粒包括rpsLp-cf启动子、genP基因、上下同源臂，rpsLp-cf启动子控制genP的表达；

(2)通过大肠杆菌介导的三亲本接合转移方法将所述质粒导入刺孢小单孢菌原始菌株；

(3)GenP过表达菌株的筛选，首先筛选有硫链丝菌素抗性菌株，经传代从中筛选硫链丝菌素敏感菌株，进而提取基因组进行PCR验证，筛选出rpsLp-cf-genP片段正确整合于染色体的菌株。

7.权利要求4-6任一项所述的高产庆大霉素C组分工程菌在生产庆大霉素C组分的应用。