[发明专利]用于纯化抗血清的固相亲和吸附剂以及获得纯化的抗体的方法

说明书

本申请公开了一种用于纯化抗血清的固相亲和吸附剂以及获得纯化的抗体的方法。本申请中，固相亲和吸附剂的制备步骤包括：用生物分子交联剂处理不含特定蛋白的人全血清；获得纯化的抗体的方法包括：步骤(A)，将待纯化的抗血清先用固相亲和吸附剂和辛酸中的一种处理，去除沉淀所得液体再用固相亲和吸附剂和辛酸中的另一种处理，去除沉淀所得液体再用硫酸铵处理，收集所得沉淀溶解后透析，即得所述纯化的抗体。本发明提供的固相亲和吸附剂与亲和层析色谱中的特异性原相比制造成本低、纯化效果好。本发明提供的固相亲和吸附剂可重复使用，并且多次重复使用仍可保持较高的纯化效果。

技术领域

本发明实施例涉及生物医药领域，特别涉及用于纯化抗血清的固相亲和吸附剂以及获得纯化的抗体的方法。

背景技术

制备抗血清时，由于免疫原不纯，制得的抗血清中常含有杂蛋白，即使使用高纯化的抗原免疫动物，制得的抗血清的纯度也不能满足要求。例如用高度纯化的IgG免疫动物，制备的抗体不可避免地含有抗γ重链的抗体、抗κ轻链和抗λ轻链的抗体。

现有技术中，主要采用盐析沉淀法、离子交换层析法和亲和层析法纯化抗血清。盐析沉淀法虽经济实惠，但除杂效果有限，制备的抗血清纯度不够。离子交换层析法利用抗体蛋白和杂蛋白的酸碱性不同，与DEAE纤维素亲和能力不同将抗体蛋白和杂蛋白分离，该方法得到的抗血清纯度高于盐析沉淀法，但不具有特异性，一些酸碱性和抗体蛋白相近的杂蛋白无法很好的分离。亲和层析法固定相需要用高纯抗原偶连层析柱填料，抗血清过柱后可除去未结合的杂蛋白，该方法虽特异性好，但由于高纯特异性抗原柱填料价格昂贵，大量制备纯化的抗体需要大量的特异性抗原，成本极高，不适宜大规模制备高纯度抗体。

因此，本领域急需开发一种纯化效果好且经济实惠的获得纯化抗体的方法，以满足低成本大规模制备高纯度抗体的需求。

发明内容

本发明实施方式的目的在于提供一种用于纯化抗血清的固相亲和吸附剂，其制造成本低、纯化效果好并且可重复使用；本发明实施方式的另一目的在于提供一种获得纯化的抗体的方法，使得低成本大规模制备高纯度抗体的需求得以满足。

为解决上述技术问题，本发明的实施方式提供了一种固相亲和吸附剂，所述固相亲和吸附剂的制备步骤包括：用生物分子交联剂处理不含特定蛋白的人全血清。

在一些优选的方案中，所述生物分子交联剂至少具有两个与其他生物分子发生交联的反应性末端；更优选地，所述生物分子交联剂至少具有两个与其他生物分子上的氨基、羧基和/或巯基发生交联的反应性末端；进一步优选地，所述生物分子交联剂含有至少两个作为反应性末端的醛基、亚胺基或酰胺基；进一步优选地，所述生物分子交联剂含有至少两个作为反应性末端的醛基。

在一些更优选的方案中，所述生物分子交联剂为其中，n为不小于1的整数；更优选地，所述生物分子交联剂为其中，n为不小于1且不大于10的整数；更优选地，所述生物分子交联剂为其中，n为不小于3且不大于6的整数；最优选地，所述生物分子交联剂为1,5-戊二醛。

在一些优选的方案中，所述不含特定蛋白的人全血清可由下述方法获得：使人全血清通过固定相连接有抗特定蛋白抗体的层析柱，收集流川液即得不含特定蛋白的人全血清。例如例如不含IgM的人全血清可通过使人全血清通过固定相连接有抗人IgM抗体的层析柱，收集流川液即得不含IgM的人全血清。

在一些优选的方案中，所述固定相连接有抗特定蛋白抗体的层析柱，由抗特定蛋白抗体偶连经活化的琼脂糖凝胶柱获得。例如：所述固定相连接有抗人IgM抗体的层析柱优选由抗人IgM抗体偶联BrCN活化的琼脂糖CL-4B凝胶获得。

在一些优选的方案中，所述固相亲和吸附剂的制备步骤包括：

步骤(1)，在搅拌条件下，在所述不含特定蛋白的人全血清中滴加所述生物分子交联剂，后持续搅拌5～30分钟，即得所述固相亲和吸附剂。

步骤(1)中，所述持续搅拌的时间优选为10～20分钟，例如15分钟；