[发明专利]一种利用qPCR技术检测绵羊FecB基因多态性的引物组及其方法

权利要求书

1.用于检测绵羊FecB基因多态性的引物组，其特征在于，所述的引物组由引物对1和引物对2组成，其中，引物对1的下游引物3’端和++型的基因位点相匹配；引物对2的下游引物的3’端和BB型的基因位点相匹配；BB型代表FecB基因的编码区第746位碱基发生A-G的突变(g.A746G)，导致第249位氨基酸由谷氨酰胺转变为精氨酸(p.Q249R)；++型代表FecB基因的编码区第746位碱基未发生改变，仍为A；

所述引物对的核苷酸序列如下：

引物对1：

上游引物:5’-ATTGGAAAAGGTCGCTATGGG-3’

下游引物:5’-TGCCTCATCAACACCGTCt-3’

引物对2：

上游引物:5’-ATTGGAAAAGGTCGCTATGGG-3’

下游引物:5’-TGCCTCATCAACACCGTCc-3’。

2.含有权利要求1所述引物组的用于检测绵羊FecB基因多态性的试剂盒。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括荧光染料。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述的荧光染料为SYBR Green I荧光染料。

5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括dNTPs、Taq DNA聚合酶、Mg²⁺以及PCR反应缓冲液中的一种或多种。

6.一种利用qPCR技术检测绵羊FecB基因多态性的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)提取待测绵羊的基因组DNA；

2)以待测绵羊的基因组DNA为模板，分别进行两个体系的qPCR扩增，体系1采用权利要求1中所述的引物对1，体系2采用权利要求1中所述的引物对2，扩增后待测样品在体系1和体系2中分别产生一个荧光信号强度变化曲线；

3)根据体系1和体系2中检测到的荧光阈值出现的顺序辨别出待测样品的FecB基因型，当体系1先达到荧光阈值时，即可判定待测样品的FecB基因型为++型；当体系2先达到荧光阈值时，即可判定待测样品的FecB基因型为BB型；当体系1和体系2的荧光信号同时达到阈值时，即可判定待测样品的FecB基因型为B+型。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤2)中实时荧光定量PCR反应使用的扩增体系以10μl计为：5-1000ng/μL基因组DNA 1μL，2×SYBR FAST qPCR Master Mix 5μL，10μmol/L上游引物0.3μL，10μmol/L下游引物0.3μL，去离子水3.4μL，总体系为10μL。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤2)中实时荧光定量PCR反应的扩增程序为：95℃预变性10min；95℃变性30sec，60℃退火1min，40个循环。

9.权利要求1所述的引物组在绵羊分子标记辅助育种中的应用。

10.权利要求2-5任一项所述的试剂盒在绵羊分子标记辅助育种中的应用。