[发明专利]一种庆大霉素C1a碱冻干粉中有关物质的检测方法

权利要求书

1.一种庆大霉素C1a碱冻干粉中有关物质的检测方法，所述方法，步骤如下：

步骤1：系统适用性溶液的配制

取庆大霉素C1a对照品适量和西索米星对照品适量，加水溶解，配制成系统适用性溶液；

步骤2：标准对照品溶液的配制

1)取西索米星对照品适量，加水溶解，配制成每1ml约含西索米星0.8mg的溶液，命名为西索米星对照品储备液溶液；取小诺霉素对照品适量，加水溶解并定量稀释成每1ml约含小诺霉素0.4mg的溶液，命名为小诺霉素对照品储备液溶液。

2)分别精密量取西索米星和小诺霉素对照品储备溶液适量，加水定量稀释制成每1ml约含西索米星20μg和小诺霉素10μg的溶液，命名为混合对照品溶液(1)；

3)分别精密量取西索米星和小诺霉素对照品储备溶液适量，加水定量稀释制成每1ml约含西索米星100μg和小诺霉素25μg的溶液，命名为混合对照品溶液(2)；

4)分别精密量取西索米星和小诺霉素对照品储备溶液适量，加水定量稀释制成每1ml约含西索米星300μg和小诺霉素100μg的溶液，命名为混合对照品溶液(3)；

步骤3：供试品溶液的配制

取庆大霉素C1a碱冻干粉样品适量，加水溶解配置成供试品溶液；

步骤4：将步骤1配制的系统适用性溶液、步骤2配制的对照品溶液和步骤3配制的供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪，得到色谱图，根据色谱图计算供试品溶液中杂质的含量；

其中，高效液相色谱仪的色谱条件如下

仪器：高效液相色谱仪1260

检测器：蒸发光散射检测器6000

色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18(4.6*250mm*5μm)

流动相：0.2mol/L三氟乙酸-甲醇(90:10)

稀释剂：水

流速：0.5ml/min

柱温：25℃

检测器参数：漂移管温度106℃；载气流速2.8L/min；不分流模式；

增益参数1

进样量：10μl。

2.根据权利要求1所述的方法，所述方法，步骤如下：

步骤1：系统适用性溶液的配制

取庆大霉素C_1a对照品适量和西索米星对照品适量，加水溶解，配制成每1ml约含庆大霉素C_1a0.05-0.15mg和西索米星0.05-0.15mg的系统适用性溶液；

步骤2：标准对照品溶液的配制

取西索米星对照品适量，加水溶解，配制成每1ml约含西索米星0.4-1.2mg的溶液，命名为西索米星对照品储备液溶液；取小诺霉素对照品适量，加水溶解并定量稀释成每1ml约含小诺霉素0.2-0.6mg的溶液，命名为小诺霉素对照品储备液溶液。

标准对照品溶液：分别精密量取西索米星对照品储备溶液和小诺霉素对照品储备溶液适量，加水定量稀释制成每1ml约含西索米星10-400μg和小诺霉素10-300μg的溶液；

步骤3：供试品溶液的配制

取庆大霉素C1a碱冻干粉样品适量，加水溶解并定量稀释成每1ml约含庆大霉素C1a 1-4mg的供试品溶液。

步骤4：将步骤1配制的系统适用性溶液、步骤2配制的对照品溶液和步骤3配制的供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪，得到色谱图，根据色谱图计算供试品溶液中西索米星、小诺霉素等杂质的含量；

计算方法如下：

其中，所述西索米星和小诺霉素杂质含量计算方法分别采用各自的标准曲线法，未知杂质采用西索米星的标准曲线法进行计算，所述标准曲线的制备如下：配制低中高三个浓度水平的西索米星和小诺霉素对照品溶液，注入高效液相色谱仪，得到色谱图，以西索米星和小诺霉素浓度对数为横坐标，峰面积对数为纵坐标，绘制标准曲线，计算线性方程，要求r不小于0.990。