[发明专利]一种基于石墨化碳SPE柱的苹果汁中展青霉素快速检测方法

说明书

本发明属于果蔬及其制品质量安全检测领域，具体公开了一种基于石墨化碳SPE柱的苹果汁中展青霉素快速检测方法，具体步骤如下：(1)以石墨化碳为填料制备展青霉素净化用石墨化碳SPE柱；(2)待测苹果汁直接过柱，用有机溶剂洗脱其吸附的展青霉素，得到净化液；(3)净化液经氮吹、复溶、过膜后用HPLC‑PDA检测得到苹果汁中展青霉素的含量。本发明利用石墨化碳填料对展青霉素的吸附作用设计净化柱，该净化柱的使用仅需上样、洗脱两步，省去了样品预处理、柱活化、淋洗的步骤，且净化效果好，提高了样品前处理效率，降低了检测成本。

技术领域

本发明属于果蔬及其制品质量安全检测领域，特别涉及一种基于石墨化碳SPE柱的苹果汁中展青霉素快速检测方法。

背景技术

展青霉素(Patulin，PAT)又名展青霉毒素、棒曲霉素、珊瑚青霉毒素，是青霉属、曲霉属等多种真菌产生的一种次级代谢产物，普遍存在于各种霉变水果中，酸性条件下稳定，碱性条件下易分解，在苹果及其制品中污染率最高。2016年，宁波口岸检出一批进口苹果汁展青霉素超标。2020年，Pick’d Cloudy Apple Juice因检出展青霉素超标而被澳大利亚食品标准局紧急召回。摄入展青霉素污染的食物，轻者可使人肠胃不适、反胃和呕吐，严重的还会导致神经麻痹、肺水肿、肾功能衰竭，对免疫系统造成毒性损害。《食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》(GB 2761-2017)中规定，苹果制品中展青霉素的限量标准为50μg/kg。

固相萃取柱(SPE柱)常用于展青霉素检测的样品前处理过程，已报道的相关净化柱有：MycoSep 228多功能净化柱、分子印迹柱、MAX固相萃取柱、PAX固相萃取柱、HLB固相萃取柱等，这些净化柱都有一定的净化效果。MycoSep 228多功能净化柱和分子印迹柱成本较高，单只售价在100元左右，其他SPE柱净化步骤繁琐，样品前处理过程耗时较长。

李锋格等报道了一种特丁基二甲基硅烷(TBDMS)衍生气相色谱-质谱(GC-MS)联用法用以快速测定苹果汁中的展青霉素(文献《特丁基二甲基硅烷衍生化气相色谱-质谱联用法快速测定苹果汁中的棒曲霉素》)，操作步骤如下：(1)样品预处理；(2)石墨化碳/C18混合型固相萃取柱净化；(3)TBDMS衍生化；(4)GC-MS测定。本方法需要对待测苹果汁进行预处理及对待测试样进行TBDMS衍生化，操作步骤繁琐，且选用的石墨化碳/C18混合型SPE柱(500mg/500mg)使用前需要活化。C18是十八烷基键合硅胶，属于疏水性填料，通过活化使支链舒展开后对展青霉素具有一定的吸附作用，且整篇文献仅提到石墨化碳能够吸附色素，并未提到其能够吸附展青霉素。

公开号为CN110646524A的中国专利文献中公开了一种黄曲霉毒素M族专用净化柱及应用，该发明以石墨化碳和纳米四氧化三铁的混合物为填料制备净化柱，该净化柱可专用于净化及检测乳及乳制品中黄曲霉毒素M族，净化柱制作方法简便、成本低廉，简化了操作流程，缩短了检测时间。该发明并未提到石墨化碳能够吸附除黄曲霉毒素M1和M2以外的其他真菌毒素。

发明内容

本发明提供了一种基于石墨化碳SPE柱的苹果汁中展青霉素快速检测方法，该检测方法前处理时间短，操作流程简便，灵敏度、精密度、准确度均能达到国标法检测的要求。

具体采用的技术方案如下：

一种基于石墨化碳SPE柱的苹果汁中展青霉素快速检测方法，包括以下步骤：

(1)以石墨化碳(PestiCarb)为填料制备展青霉素净化用石墨化碳SPE柱；

(2)待测苹果汁在重力作用下直接流经该SPE柱，后用有机溶剂洗脱其吸附的展青霉素，得到净化液；

(3)净化液经氮吹、复溶、过膜后用HPLC-PDA检测得到苹果汁中展青霉素的含量。