[发明专利]基于双模式纳米探针对钙离子进行拉曼-荧光双模式检测的方法

权利要求书

1.一种双模式纳米探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)向酶链溶液中加入硫醇类还原剂反应1-2h，加入纳米金星后于35-40℃下震荡反应2-4h，加氯化钠至其终浓度为200-400mM，继续反应11-13h，反应结束后加入表面配体一，离心洗涤，加入表面配体二，得到酶链功能化纳米金星；

(2)向步骤(1)得到的酶链功能化纳米金星中加入底物链溶液，在35-40℃下孵育3-4h，离心除去多余的底物链，得到所述双模式纳米探针；

其中，所述底物链和所述酶链部分互补，酶切位点位于所述底物链上，所述酶链可经Ca²⁺激活作用于所述酶切位点并切断所述底物链；

所述底物链的5’端或3’端修饰荧光基团，所述酶链的5’端或3’端修饰巯基；

所述表面配体一包括甲氧基聚乙二醇硫醇、羧基聚乙二醇硫醇、氨基聚乙二醇硫醇、聚乙二醇硫醇和牛血清白蛋白中的一种或多种，所述表面配体二包括6-巯基-1-己醇、巯基乙酸和巯基二丁酸中的一种或多种；

所述酶链、所述表面配体一和所述表面配体二通过Au-S共价键与所述纳米金星连接。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：在步骤(1)中，所述酶链溶液的浓度为170-200μM。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：在步骤(2)中，所述底物链溶液的浓度为30-50μM。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述纳米金星、底物链、酶链、表面配体一和表面配体二的摩尔比为0.5-1.5:1600-2200:1750-2600:1000-10000:1000-10000。

5.权利要求1-4任一项所述的制备方法制备的双模式纳米探针。

6.一种非诊断非治疗目的的钙离子双模式检测方法，其特征在于，包括以下步骤：将权利要求5所述双模式纳米探针混匀在无钙基本培养基上，与待测细胞共培养6-7h后，吸出无钙基本培养基并清洗，加入含有毒素的无钙基本培养基共培养30-90min，吸出无钙基本培养基并清洗，将细胞染色和固定，进行SERS光谱检测、SERS成像或荧光成像，得到细胞内Ca²⁺的检测结果；

或将权利要求5所述双模式纳米探针与含Ca²⁺的溶液混合反应，离心后进行SERS光谱检测、SERS成像或荧光成像，得到体外Ca²⁺的检测结果。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述毒素包括T-2毒素。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：含有毒素的无钙基本培养基中，毒素浓度为对应培养时间下的IC₅₀值。

9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：双模式纳米探针与无钙基本培养基混匀时，所述双模式纳米探针的浓度为0.1-0.5nM。

10.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述待测细胞包括人宫颈癌细胞Hela、人肝癌细胞HepG2、人乳腺癌细胞MCF-7和人结直肠腺癌细胞Caco-2中的一种或多种。