[发明专利]基于糖肽的荧光分子印迹聚合物及制备方法和在糖蛋白筛选和检测中的应用

说明书

基于糖肽的荧光分子印迹聚合物及制备方法和在糖蛋白筛选和检测中的应用，将OVA的短糖肽固定化的N‑GQDs@SiO₂@FPBA分散在磷酸盐缓冲溶液中，加入MAA和MBA，超声溶解后在28‑32℃下预组装11‑13h，然后加入TEMED和APS，并在惰性气体保护下于28‑32℃反应5‑7h，洗脱，得到基于糖肽的荧光分子印迹聚合物。与传统的糖蛋白检测方法相比，本发明的基于糖肽的荧光分子印迹聚合物具有高特异性识别且灵敏快速检测的优点，从生物样品中筛选并检测痕量目标糖蛋白是非常有意义的。

技术领域

本发明属于生物传感和生物分析技术领域，涉及基于糖肽的荧光分子印迹聚合物及制备方法和在糖蛋白筛选和检测中的应用。

背景技术

糖蛋白是蛋白质家族中非常重要的部分，参与多种细胞功能，如分子识别、信号转导、细胞粘附和免疫应答。临床试验发现，人体糖蛋白异常与多种癌症的发生密切相关，如甲胎蛋白与肝癌，癌胚抗原与结肠癌或直肠癌等，因此常被用作疾病诊断和靶向治疗的重要生物标志物。但是，具有重要生物学意义的糖蛋白在生物样品中浓度极低以及复杂物质的干扰，使其检测面临较大的挑战。常见的糖蛋白检测方法，如酶联免疫吸附测定和抗原-抗体，是基于抗体的使用，但抗体存在稳定性差、成本高、耗时且生产困难等不足。因此，寻找一些选择性识别、稳定性强、快速响应、低成本、灵敏度高的方法来检测复杂生物样品中痕量糖蛋白具有重要的价值和意义。

近年来，由于灵敏度高、响应速度快、易于操作和可视化等优点，荧光方法在生物成像和生物分析等领域引起了广泛的关注，并被用于痕量物质的检测。但是，常用的基于荧光检测的分析方法无法特异性地捕获目标物质。分子印迹聚合物(MIPs)，称为“人造抗体”，是在模板分子存在下通过聚合反应合成的对目标物质具有选择性识别和结合能力的高聚物，具有成本低，制备简单，选择性高和稳定性强等优点。因此，MIPs和荧光检测结合形成的荧光分子印迹聚合物(FMIPs)，由于同时具备MIPs的高选择性以及荧光检测的高灵敏性和可视性，成为了识别和检测复杂生物样品中糖蛋白的有前途的材料。但是，由于蛋白质构象灵活，结构复杂，分子大以及遇有机溶剂易变性等不足，导致其在MIPs中的应用受到限制。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于糖肽的荧光分子印迹聚合物及制备方法和在糖蛋白筛选和检测中的应用，该方法提高g-FMIPs印迹位点的结合特异性，并能够应用于复杂生物样品中特定糖蛋白的筛选和检测。

本发明为实现上述目的，采用如下的技术方案：

基于糖肽的荧光分子印迹聚合物的制备方法，将OVA的短糖肽固定化的N-GQDs@SiO₂@FPBA分散在磷酸盐缓冲溶液中，加入MAA和MBA，超声溶解后在28-32℃下预组装11-13h，然后加入TEMED和APS，并在惰性气体保护下于28-32℃反应3-9h，洗脱，得到基于糖肽的荧光分子印迹聚合物。

本发明中进一步的在于，MAA和MBA的比为11-88μL：38-42mg；

MAA、TEMED和APS的比为11-88μL：95-105μL：595-605mg。

本发明中进一步的在于，OVA的短糖肽固定化的N-GQDs@SiO₂@FPBA通过以下过程制得：

将完整OVA固定化的N-GQDs@SiO₂@FPBA分散到碳酸氢铵缓冲溶液中，并加入Tryspin溶液，37℃下反应3h后洗涤，得到OVA的长糖肽固定化的N-GQDs@SiO₂@FPBA；

将OVA的长糖肽固定化的N-GQDs@SiO₂@FPBA分散到碳酸氢铵缓冲溶液中，加入Pronase E溶液，37℃下反应3h后洗涤，得到OVA的短糖肽固定化的N-GQDs@SiO₂@FPBA。