[发明专利]杂交瘤细胞株及其产生的单克隆抗体和应用以及一种免疫荧光试纸条

权利要求书

1.一种CK-MB免疫荧光试纸条，其特征在于，所述免疫荧光试纸条包括PVC底板、硝酸纤维素膜、吸水垫、样品垫和结合垫，其中所述硝酸纤维素膜上沿层析方向先后设有检测线和质控线，所述检测线喷涂有保藏编号为：CCTCC NO：C202086的杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体，所述质控线喷涂有羊抗兔IgG抗体；

所述结合垫上填有由荧光微球和CK-MB抗体复合形成的荧光标记物；所述荧光标记物为经羧基修饰的荧光微球表面的羧基经EDC和NHS活化剂活化后，与CK-MB抗体上的氨基酸共价连接，共同结合形成的复合物；

所述检测线喷涂的单克隆抗体浓度为2mg/ml，所述质控线喷涂的羊抗兔IgG抗体浓度为1mg/ml；

所述样品垫的制备方法为：向pH为7~8的磷酸盐缓冲液中加入0.15~0.25%的Tween-20、0.8~1.2%的蔗糖、0.15~0.25%的PEG-20000和0.4~0.6%的BSA，将样品垫原料浸入所得混合溶液中，在3~5℃的环境下浸泡10~15h，取出后在35~40℃的环境中恒温烘干后即得所述样品垫；

所述结合垫的制备方法为：向pH为7~8的磷酸盐缓冲液中加入0.3~0.5%的Tween-20、1.4~1.6%的海藻糖、0.15~0.25%的PEG-20000和0.4~0.6%的BSA，将结合垫原料浸入所得混合溶液中，在3~5℃的环境下浸泡10~15h，取出后在35~40℃的环境中恒温烘干后，加入所述荧光微球和CK-MB抗体复合形成的荧光标记物后即得所述结合垫；

所述荧光标记物的制备方法包括以下步骤：

S1、清洗：向10μl荧光微球中加入100μl的0.1mol/L的MES缓冲液，所述缓冲液的pH=5.5~6.5，混合均匀后以12000~14000rpm的转速离心20~30min，反复清洗两次后去除上清液，加入100μl相同的MES缓冲液，放入超声波清洗仪超声10~20min后使其分散均匀；

S2、分别取出10μl的1mmol/L的EDC活化剂和1.5mmol/L的NHS活化剂加入至清洗后的微球溶液中，在室温下活化1~2h；

S3、二次清洗：活化完成后以12000~14000rpm的转速离心20~30min，反复清洗两次后去除上清液，加入100μl的磷酸缓冲液，放入超声波清洗仪超声分散10~20min使其分散均匀；

S4、将二次清洗后的荧光微球与CK-MB抗体按1:1的比例偶联；

S5、偶联后以12000~14000rpm的转速离心20~30min后，取上清液检测偶联率，并反复清洗两次，加入重悬液后，放入超声波清洗仪超声分散10~20min后使其分散均匀后转移至3~5℃的环境中保存备用。