[发明专利]一种提高番茄对土传性病害青枯病抗性的方法有效
| 申请号： | 202110432179.8 | 申请日： | 2021-04-21 |
| 公开（公告）号： | CN113073111B | 公开（公告）日： | 2022-08-05 |
| 发明（设计）人： | 师恺;丁淑婷;王萍;吕建荣;林藤;喻景权 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N15/29;A01H5/12;A01H6/82 |
| 代理公司： | 杭州天勤知识产权代理有限公司 33224 | 代理人： | 韩聪 |
| 地址： | 310013 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 提高 番茄 性病 害青枯病 抗性 方法 | ||
1.核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的PSKR1基因在提高番茄对土传性病害青枯病抗性中的应用，其特征在于，所述应用包括：利用基因编辑技术沉默番茄PSKR1基因编码蛋白的表达，进而获得抗青枯病性能增强的番茄突变体；PSKR1基因突变体植株内的游离态氨基酸含量上升。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，利用CRISPR/CAS9技术对番茄PSKR1基因进行沉默。
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述番茄突变体中基因突变的PSKR1基因的序列为如SEQ ID NO.1所示核苷酸序列中第207位插入T；或者如SEQ ID NO.1所示核苷酸序列中第204～207位缺失。
4.一种提高番茄对土传性病害青枯病抗性的方法，其特征在于，包括：
(1)在核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的番茄PSKR1蛋白编码区选取含有PAM结构的靶标片段，以靶标片段PAM结构前20个碱基为依据，进行引物设计，构建CRISPR/CAS9载体；
(2)将CRISPR/CAS9载体转化受体番茄材料中，培育，获得不含外源Cas9蛋白且稳定遗传的纯合突变体株系，PSKR1基因突变体植株内的游离态氨基酸含量上升。
5.如权利要求4所述的提高番茄对土传性病害青枯病抗性的方法，其特征在于，所述靶标片段PAM结构前20个碱基序列为如SEQ ID NO.3所示。
6.如权利要求5所述的提高番茄对土传性病害青枯病抗性的方法，其特征在于，构建所述CRISPR/CAS9载体的引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示。
7.如权利要求4所述的提高番茄对土传性病害青枯病抗性的方法，其特征在于，利用农杆菌介导技术将CRISPR/CAS9载体转化至番茄子叶中。
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