[发明专利]一种玉米基因ZmNAC7的克隆方法、应用及应用方法

权利要求书

1.玉米ZmNAC7基因在抗由禾谷镰孢菌引起的玉米茎腐病中的应用，其特征在于，所述ZmNAC7基因的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示，所述在抗由禾谷镰孢菌引起的玉米茎腐病中的应用为过表达ZmNAC7基因，包括以下操作步骤：

S1，pMD19-ZmNAC7重组质粒的构建：连接所述的玉米基因ZmNAC7的克隆与pMD19-T载体，对纯化的基因ZmNAC7的克隆加A尾，得到带A尾的目的基因，然后将带有A尾的目的基因与pMD19-T载体连接，得到重组质粒pMD19-T-ZmNAC7；

S2，植物表达载体pCambia1300-ZmNAC7的构建：以测序正确的pMD19-T-ZmNAC7质粒作为模板进行PCR扩增，从而在质粒两端加上酶切位点与载体同源区段，切胶后纯化回收目的片段，把pCambia1300表达载体的质粒用限制性内切酶Hind III和Xba I进行双酶切，双酶切完成以后进行琼脂糖凝胶电泳，并将目的片段切胶回收，然后用一步克隆连接酶将切开的pCambia1300表达载体的质粒与目的基因进行连接，得到植物表达载体pCambia1300-ZmNAC7；

S3，农杆菌侵染植株：种植野生型拟南芥，制备农杆菌感受态细胞，然后用植物表达载体pCambia1300-ZmNAC7转化农杆菌感受态细胞，利用农杆菌侵染拟南芥，得到能有效克隆玉米ZmNAC7基因的转基因拟南芥植株；

与野生型相比，所述转基因拟南芥植株对禾谷镰孢菌的抗性更强。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的农杆菌为农杆菌GV3101。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，S3中农杆菌侵染植物体后，经过三代自交后筛选出含有ZmNAC7基因的植物体。