[发明专利]一种用于分离旱獭组织中布鲁氏菌的培养基及其制备方法

说明书

本发明公开了一种用于分离旱獭组织中布鲁氏菌的培养基及其制备方法。具体由琼脂、胰蛋白月示、氯化钠、无水亚硫酸钠、酵母提取物、牛肝浸粉、D‑葡萄糖、赤藓糖醇、枸橼酸钠、特级马血清、杆菌肽、放线菌酮及蒸馏水或双蒸水组分构成。该培养基是一种能够对布鲁氏菌进行培养的固体培养基，营养加均衡；所添加的组分即满足了布鲁氏菌的代谢需求的碳源、氮源等，又抑制污染样品中其他细菌的生长，提高污染样品中布鲁氏菌的检出率；各组分之间相辅相成，达到协同增效的作用；本发明提供的培养基能够满足自喜马拉雅旱獭组织中分离布鲁氏菌的生长繁殖需求，具有质量稳定、制备简便和培养菌数高的优势。

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一种用于分离旱獭组织中布鲁氏菌的培养基及其制备方法。

背景技术

布鲁氏菌病(简称布病)是一种由布鲁氏菌引起的人畜共患性疾病，世界卫生组织(WHO)和世界动物卫生组织(OIE)均将其列为法定报告传染病之一，我国将其列为乙类传染病。布鲁氏菌是一种细胞内寄生的需氧型革兰氏阴性菌，多寄生于网状内皮系统，可在人和动物体内存活，它的繁殖生长对营养要求较高，且生长缓慢，在37℃、pH6.6～7.4环境生长最佳。青海省布鲁氏菌病病原分为三个种共六个生物型，以羊种布鲁氏菌为主，在菌种与宿主中存在有转移的现象，菌株也有变异发生。

喜马拉雅旱獭是青藏高原特有的野生动物，主要栖息在高原高山草原、高寒草甸、灌丛草甸和高寒草原的食草类哺乳动物，生活习性是每年4月底出蜇、10月底入蜇冬眠。近几年，国内及国内西北地区对旱獭及喜玛拉雅旱獭进行血清样品调查后，未分离出布鲁氏菌。但是，青南地区对245份喜马拉雅旱獭全血样品，抗体阳性13份，分离到 1株疑似布鲁氏菌。可以推断喜马拉雅旱獭可以感染布病，但未能从旱獭体内分离出布鲁氏菌。

现有分离、培养布鲁氏菌的培养基方案中，经常使用布鲁氏琼脂培养基用于培养布鲁氏菌，达到使用要求。但是，这种培养基适用于无污染的样品，对已污染和组织样品而言分离纯化布鲁氏菌较困难和费时，因此，寻找一种从已污染和组织样品中分离、纯化布鲁氏菌的适宜、高效的培养基，对传统培养基和方法进行改进，是急需解决的问题。本申请人首先从喜马拉雅旱獭组织样品中分离布鲁氏菌，现有的技术无法实现在喜马拉雅旱獭中检测出布病抗体阳性的同时分离出布鲁氏菌，另外，在进行从喜马拉雅旱獭组织样品中分离布鲁氏菌的实际操作中，由于样品多有污染，其中混有其他各种病原性微生物，因此需要选择敏感性优异的培养基用于布鲁氏菌的培养和分离。

发明内容

基于上述技术问题，本发明通过选择提供敏感性优异的培养基能够从喜马拉雅旱獭组织样品中分离出布鲁氏菌，同时初步分析喜马拉雅旱獭组织样品中分离出的疑似菌是否是布鲁氏菌。目的是以喜马拉雅旱獭为对象提供一种用于分离旱獭组织中布鲁氏菌的培养基及其制备方法。

本发明保护一种用于分离旱獭组织中布鲁氏菌的培养基，制备 1000mL的该培养基，具体由如下的组分构成：琼脂13～18g；胰蛋白月示10～18g；氯化钠4～8g；无水亚硫酸钠0.1～0.4g；酵母提取物2～5g；牛肝浸粉5～15g；D-葡萄糖2～6g；赤藓糖醇0.05～0.2g；枸橼酸钠 0.2～0.5g；特级马血清6～10ml；杆菌肽15～25单位/ml；放线菌酮 100～200ug/ml；余量的蒸馏水或双蒸水。

进一步的，制备1000mL的该培养基，具体由如下的组分构成：琼脂13～15g；胰蛋白月示10～15g；氯化钠4～5g；无水亚硫酸钠0.1～0.2g；酵母提取物2～3g；牛肝浸粉5～10g；D-葡萄糖2～3g；赤藓糖醇0.05～0.1g；枸橼酸钠0.2～0.3g；特级马血清6～8ml；杆菌肽15～20 单位/ml；放线菌酮100～150ug/ml；余量的蒸馏水或双蒸水。