[发明专利]一种用于分离旱獭组织中布鲁氏菌的培养基及其制备方法

权利要求书

1.一种用于分离旱獭组织中布鲁氏菌的培养基，其特征在于，制备1000mL的该培养基，具体由如下的组分构成：

琼脂13～18g；胰蛋白月示10～18g；氯化钠4～8g；无水亚硫酸钠0.1～0.4g；酵母提取物2～5g；牛肝浸粉5～15g；D-葡萄糖2～6g；赤藓糖醇0.05～0.2g；枸橼酸钠0.2～0.5g；特级马血清6～10ml；杆菌肽15～25单位/ml；放线菌酮100～200ug/ml；余量的蒸馏水或双蒸水。

2.根据权利要求1所述的一种用于分离旱獭组织中布鲁氏菌的培养基，其特征在于，制备1000mL的该培养基，具体由如下的组分构成：琼脂13～15g；胰蛋白月示10～15g；氯化钠4～5g；无水亚硫酸钠0.1～0.2g；酵母提取物2～3g；牛肝浸粉5～10g；D-葡萄糖2～3g；赤藓糖醇0.05～0.1g；枸橼酸钠0.2～0.3g；特级马血清6～8ml；杆菌肽15～20单位/ml；放线菌酮100～150ug/ml；余量的蒸馏水或双蒸水。

3.根据权利要求1所述的一种用于分离旱獭组织中布鲁氏菌的培养基，其特征在于，制备1000mL的该培养基，具体由如下的组分构成：琼脂15～18g；胰蛋白月示15～18g；氯化钠5～8g；无水亚硫酸钠0.2～0.4g；酵母提取物3～5g；牛肝浸粉10～15g；D-葡萄糖3～6g；赤藓糖醇0.1～0.2g；枸橼酸钠0.3～0.5g；特级马血清8～10ml；杆菌肽20～25单位/ml；放线菌酮150～200ug/ml；余量的蒸馏水或双蒸水。

4.根据权利要求1所述的一种用于分离旱獭组织中布鲁氏菌的培养基，其特征在于，制备1000mL的该培养基，具体由如下的组分构成：琼脂13g；胰蛋白月示10g；氯化钠5g；无水亚硫酸钠0.1g；酵母提取物3g；牛肝浸粉5g；D-葡萄糖2g；赤藓糖醇0.1g；枸橼酸钠0.2g；特级马血清6ml；杆菌肽15单位/ml；放线菌酮150ug/ml；余量的蒸馏水或双蒸水。

5.根据权利要求1-4任意一项所述的一种用于分离旱獭组织中布鲁氏菌的培养基的制备方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

步骤一：称取上述比例的琼脂、胰蛋白月示、氯化钠、无水亚硫酸钠、酵母提取物、牛肝浸粉加入蒸馏水或双蒸水中混合至1000mL，得混合物；

步骤二：将所得到的上述混合物煮沸、沉淀、过滤，取上清液，备用；

步骤三：向步骤二所述的上清液中加入上述比例的D-葡萄糖、赤藓糖醇、枸橼酸钠，充分混匀，用上述比例的氢氧化钠溶液调节混合物的pH值为7.0～7.2，然后将混合物封装于洁净、干燥的烧瓶中，116～121℃条件下高压灭菌20～30min；

步骤四：待高压灭菌后的混合物冷却至50～60℃时，在无菌条件下加入灭菌后的特级马血清、杆菌肽及放线菌酮，轻轻旋转烧瓶中的混合物，待混匀后将烧瓶中的液体于无菌条件下快速倾倒至灭菌后的平皿中，每一个平皿中倾倒液体12～18ml；

步骤五：平皿平放于室温中隔夜，次日观察平皿中所述液体是否成固体、是否生长菌落；若观察到不生长任何菌落的固体物时，即为制备合格的上述培养基，于2～8℃条件下冷藏，备用。

6.根据权利要求1-4任意一项所述的一种用于分离旱獭组织中布鲁氏菌的培养基的制备方法，其特征在于，所述特级马血清是血浆中除去纤维蛋白分离出液体或指纤维蛋白已被除去的血浆。

7.根据权利要求1-4任意一项所述的一种用于分离旱獭组织中布鲁氏菌的培养基的制备方法，其特征在于，所述胰蛋白月示是采用动物组织、混合蛋白、经生物酶消化而制成的。

8.根据权利要求1-4任意一项所述的一种用于分离旱獭组织中布鲁氏菌的培养基培养布鲁氏菌的方法，其特征在于，具体步骤包括如下：

培养温度为恒温37℃，对培养气氛没有特别限制，只要布鲁氏菌的生长没有受到明显抑制即可，可以向培养气氛中引入二氧化碳以增加其浓度，其中，引入二氧化碳的量为5～10％；培养时间达到布鲁氏菌的水平生长即可，即5～60天。

9.根据权利要求8所述的一种用于分离旱獭组织中布鲁氏菌的培养基培养布鲁氏菌的方法，其特征在于，所述引入二氧化碳的量为5％；培养时间达到布鲁氏菌的水平生长即可，即5～25天。