[发明专利]一种用于去除狂犬病疫苗制品中鸡胚宿主蛋白的方法

说明书

本发明涉及一种用于去除狂犬病疫苗制品中鸡胚宿主蛋白的方法，包括：将收获的病毒鸡胚细胞培养上清过滤并浓缩处理后，采用含氯化钠以及精氨酸的磷酸缓冲液洗滤并加入β‑丙内酯进行灭活水解，再加入人血清白蛋白并低温静置后，进行超声以及纯化，即得已去除鸡胚宿主蛋白的狂犬病疫苗制品纯化液。本发明的方法中，加入人血白蛋白，可有效减少超声波对病毒颗粒的影响；进一步降低了产品中杂蛋白的含量；通过超声波清洗机对灭活水解液进行超声处理，洁净度要求及操作难度低，稳定性高。

技术领域

本发明涉及疫苗制品纯化技术领域，尤其涉及一种用于去除狂犬病疫苗制品中鸡胚宿主蛋白的方法。

背景技术

狂犬病毒培养收获液常含有各种成分的混合体系。采用Vero细胞作为培养基质的狂犬病毒疫苗制备中，常将培养收获液澄清浓缩后，采用超声及层析的方式去除制品中的DNA杂质。而现有鸡胚法制备狂犬病疫苗的工艺，是将鸡胚细胞剪碎，消化分散后的鸡胚原代成纤维细胞作为培养基质。收获的培养液中常含有细胞碎片、游离宿主DNA及鸡胚宿主蛋白。收获液经澄清过滤后，通常采用简单的超滤浓缩及分子筛层析纯化工艺得到终产品。虽然鸡胚法制备狂犬病疫苗对宿主DNA无严格要求，但采用现有工艺制备的狂犬病疫苗，残留的宿主蛋白较高，蛋白去除率低，易引起临床的不良反应。造成产品中杂蛋白偏高的主要原因有：(1)宿主细胞蛋白质难以通过分子大小差异去除。部分宿主蛋白分子量大小不一，部分宿主蛋白及游离的糖蛋白等形成了大分子聚集体，和狂犬病毒粒子较为接近。(2)宿主DNA加剧了蛋白的聚集。宿主基因组DNA断裂产生大量断裂的大片段的DNA带有的粘性末端，在超滤浓缩过程中加剧了病毒及宿主蛋白的聚集。(3)超声只能去除部分杂蛋白。直接超声处理浓缩液，可去除部分杂蛋白，但仍残留较高蛋白聚集体，难以保证产品最终质量。

因此，亟需一种用于去除狂犬病疫苗制品中鸡胚宿主蛋白的方法。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种用于去除狂犬病疫苗制品中鸡胚宿主蛋白的方法，向浓缩液中加入一定浓度的人血白蛋白，以分散病毒块及聚集蛋白体；并同时采用一定功率、频率及功率密度的超声波处理，打断大片段DNA，降低浓缩液黏性；通过分子筛层析，将分散的宿主蛋白聚集体及大片段DNA和病毒颗粒分离，再通过离子交换层析进一步精纯去除组分内的小分子蛋白，达到提高产品质量及合格率的目的。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：

提供一种用于去除狂犬病疫苗制品中鸡胚宿主蛋白的方法，包括：

将收获的病毒鸡胚细胞培养上清过滤并浓缩处理后，采用含氯化钠以及精氨酸的磷酸缓冲液洗滤并加入β-丙内酯进行灭活水解，再加入人血清白蛋白并低温静置后，进行超声以及纯化，即得已去除鸡胚宿主蛋白的狂犬病疫苗制品纯化液。

优选地，所述过滤为依次经3.0μm～5.0μm的滤芯以及0.45μm～1.2μm的滤芯进行澄清过滤。

优选地，所述浓缩为经100kD～300kD的超滤膜包或中空纤维进行浓缩。

优选地，所述洗滤为采用pH为7.6～8.0的含50mmol/L～300mmol/L氯化钠以及100mmol/L～300mmol/L精氨酸的磷酸缓冲液进行洗滤5～10倍。

优选地，所述灭活水解为按1:2000～1:6000加入β-丙内酯进行灭活水解。

优选地，所述人血清白蛋白的终浓度为0.5％～5％。

进一步地，所述人血清白蛋白的终浓度为0.75％～1.5％。

优选地，所述低温静置为于2℃～8℃下静置12h～24h。

优选地，所述超声包括：转移至超声专用瓶中，采用超声波清洗机于0℃～25℃下超声0.5h～3h；

其中，转移的液体体积不超过所述超声专用瓶总体积的1/4～2/3；