[发明专利]表达量高和活性强的纤连蛋白突变体的编码序列及其应用

权利要求书

1.一种纤连蛋白突变体，其特征在于：其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.权利要求1中所述的纤连蛋白突变体的编码序列，其特征在于：如SEQ ID NO.3所示。

3.一种纤连蛋白突变体的制备方法，其特征在于：将权利要求1中所述的纤连蛋白突变体的编码序列克隆到表达载体上，得到重组载体；将重组载体转化到宿主细胞中进行表达、纯化，即获得所述的纤连蛋白突变体；

所述的表达载体为pET-28；

所述的宿主细胞为大肠杆菌；

所述的宿主细胞为大肠杆菌E.coli BL21(DE3)。

4.根据权利要求3所述的纤连蛋白突变体的制备方法，其特征在于：所述的方法的具体操作为：

S1、构建重组载体：在所述的纤连蛋白突变体的编码序列的两端分别引入酶切位点并进行相应的双酶切，然后与经同样双酶切的质粒pET-28a进行重组连接，得到重组载体并命名为重组载体pET-28a-FN；

S2、诱导表达：将步骤S1所得重组载体pET-28a-FN转入大肠杆菌E.coli BL21(DE3)，得到表达菌株；接着使用含有卡那霉素的LB培养基将该表达菌株于37℃、180～200rpm的条件进行培养，在OD₆₀₀=0.8时，加入终浓度为1 mmol/L 的IPTG，37℃诱导表达4h后，收集菌体；

S3、纯化：菌体按质量/体积比1：10的比例重新悬于平衡缓冲液后对菌体进行破碎，离心，收集上清；上清经Ni-NTA亲和层析，Sephadex G-25分子筛脱咪唑，以及3 KDa的超滤管浓缩，得到纯化后的纤连蛋白突变体。

5.根据权利要求4所述的纤连蛋白突变体的制备方法，其特征在于：

步骤S1中所述的酶切位点为NdeI和BamHI。

6.权利要求1中所述的纤连蛋白突变体在促细胞增殖和/或粘附活性中的应用，所述的应用为非疾病治疗或诊断的实验研究中的用途。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：

所述的应用为制备促细胞增殖和/或粘附活性药物。