[发明专利]一种鉴定肿瘤类器官的方法

说明书

本发明涉及类器官鉴定技术领域，具体公开了一种鉴定肿瘤类器官的方法，本发明的方法包括以下步骤：检测待测细胞群体的APOB基因或CREB3L3基因的表达水平。通过本发明的方法可以使得在前期培养和扩增过程中可以及时用较少样本量快速确定其肿瘤特性，该方法材料用量少，结果差异明显，且无需生信数据支撑。

技术领域

本发明涉及类器官鉴定技术领域，涉及一种鉴定肿瘤类器官的方法，尤其是涉及一种鉴定肝细胞癌类器官的方法。

背景技术

类器官是将具有成体干细胞潜能的细胞或组织在体外进行3D培养而成的三维微观结构。基于患者肿瘤组织的类器官培养被称为肿瘤类器官培养。肿瘤类器官具备自主生长及更新的能力，并且可以保留肿瘤组织特点和一定的遗传稳定性，是目前最接近临床状况的体外肿瘤疾病模型。然而，肿瘤组织中往往混杂着正常组织，随着肿瘤类器官传代培养，源自正常组织的类器官可能会逐渐替代肿瘤类器官，导致所培养的肿瘤类器官群体逐渐丧失肿瘤特性。因此，而对于肿瘤类器官是否还保留有癌症特性的鉴定尤其重要。

目前，多种已有技术被用于肿瘤类器官的鉴定。第一种是对类器官的形态进行观察，通过形态差异判断肿瘤类器官的保留比例，该方法可行性低、错误率高；第二种方法是对类器官的特定蛋白表达进行鉴定，该方法要求较大的检测样本量，无法在培养的早期进行鉴定；第三种方法是根据已知的患者测序结果，通过基因测序确认癌相关突变的情况，该方法需要肿瘤样本测序结果，同时需要较大的样本量与较长的检测周期。因此，亟需一种样本量少、结果差异明显、无需生信数据支撑且能及时快速测定肿瘤类器官特性的鉴定方法。

发明内容

本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种鉴定肿瘤类器官的方法，该方法通过检测肿瘤类器官APOB基因或CREB3L3基因表达情况，使得在前期培养和扩增过程中可以及时用较少样本量快速确定其肿瘤特性，该方法材料用量少，结果差异明显，且无需生信数据支撑。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

本发明的目的提供了一种鉴定肿瘤类器官的方法，包括以下步骤：

检测待测细胞群体的APOB基因或CREB3L3基因的表达水平。

本发明的方法不仅有效的缩短相关培养的周期及成本，并且实现针对有临床价值的肿瘤类器官的快速选择，同时减少无意义的资源浪费，由此能更好地为构建可信的肿瘤类器官平台服务。

作为本发明所述鉴定肿瘤类器官的方法的优选实施方式，所述方法包括以下步骤：

检测待测细胞群体的APOB基因或CREB3L3基因的拷贝数或拷贝倍数。

作为本发明所述鉴定肿瘤类器官的方法的优选实施方式，所述肿瘤为肝癌。

作为本发明所述鉴定肿瘤类器官的方法的优选实施方式，所述方法具体包括以下步骤：

提取正常组织类器官RNA和肿瘤类器官RNA，将正常组织类器官RNA、肿瘤类器官RNA及参照RNA进行反转录分别得到cDNA产物，然后分别将cDNA产物进行PCR扩增，得到针对APOB基因或CREB3L3基因的Cp值，通过相对定量或绝对定量的方式计算肿瘤类器官RNA中APOB基因或CREB3L3的拷贝数或拷贝数倍数。

作为本发明所述鉴定肿瘤类器官的方法的优选实施方式，基于绝对定量法，参照RNA为APOB标准品RNA，基于相对定量法，参照RNA为参考细胞系RNA。

在本发明的技术方案中，绝对定量法通过计算APOB标准品RNA的拷贝数得到Cp值的线性关系式，从而计算样本中APOB的表达拷贝数；相对定量法通过计算样本与参照细胞系的Cp差值计算APOB或CREB3L3的样本间拷贝数倍数。通过试验证明未分化的肝细胞癌类器官的拷贝数是未分化的正常肝组织类器官的拷贝数5倍以上，证明该肝细胞癌类器官的癌症特性保留。