[发明专利]一种烟草青枯病菌快速免疫检测试纸条及其制备方法和应用

说明书

本发明提供一种烟草青枯病菌快速免疫检测试纸条及其制备方法和应用，属于生物检测技术领域。所述试纸条包含抗烟草青枯病菌单克隆抗体，其中，所述抗烟草青枯病菌单克隆抗体的重链可变区包含如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，其轻链可变区包含如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。本发明通过对现有检测烟草青枯病菌的胶体金试纸条进行改良优化，从而成功制备得到一种具有特异性强、灵敏度高、操作简便、反应快速等优点的烟草青枯病菌快速免疫检测试纸条，因此具有良好的实际应用之价值。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种烟草青枯病菌快速免疫检测试纸条及其制备方法和应用。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

由青枯劳尔氏菌(Ralstonia solanacearum)引起的细菌性青枯病是一种毁灭性土传病害。除了侵染茄科作物，R.solanacearum还可以侵染50多个科的200多种植物，是烟草、番茄、辣椒、茄子、生姜、马铃薯、花生、草莓和香蕉等农作物产量和品质的重要限制因素。由于其寄主范围广且防治困难，因此被称为植物的“癌症”。由于缺乏有效的防治药剂，在我国农用硫酸链霉素一直被用来青枯病的防治，而随着我国停止使用农用硫酸链霉素，植物青枯病的防治面临巨大挑战。

对烟草青枯病菌的准确、快速检测是对烟草青枯病执行防控措施的重要前提。目前，对该病原菌的检测主要是在基因分子水平对病原菌进行检测，包括PCR等。基因分子水平检测技术具有准确、灵敏的优势，但需要较为严格的实验条件、措施及操作，不能完全满足现存快速检验检疫的需求。因此，建立对烟草青枯病菌现场快速、准确的轻简型检测方法对严格执行防控措施具有极大的现实意义。

胶体金免疫层析试纸条由于其快速便捷、操作简单、成本低、性能稳定等特点而备受关注。以胶体金颗粒为标记物，利用抗原-抗体的特异性反应，通过裸眼可见的颜色反应来检测目标分析物。因此，胶体金免疫层析试纸条对病原物的现场快速检测具有重要意义。发明人发现，现有技术中已经有检测烟草青枯病菌的胶体金试纸条，然而，其普遍存在检测灵敏度低、特异性差、检测时间长等缺陷，从而影响其实际应用。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供一种烟草青枯病菌快速免疫检测试纸条及其制备方法和应用。本发明通过对现有检测烟草青枯病菌的胶体金试纸条进行改良优化，从而成功制备得到一种具有特异性强、灵敏度高、操作简便、反应快速等优点的烟草青枯病菌快速免疫检测试纸条，因此具有良好的实际应用之价值。

具体的，本发明涉及以下技术方案：

本发明的第一个方面，提供一种烟草青枯病菌快速免疫检测试纸条，所述试纸条按照常规胶体金试纸条设置，所述试纸条包含抗烟草青枯病菌单克隆抗体，其中，所述抗烟草青枯病菌单克隆抗体的重链可变区包含如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，其轻链可变区包含如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。

具体的，所述抗烟草青枯病菌单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列具有与SEQID NO.1相比至少80％的同源性；更优选地，具有至少90％的同源性；最优选地，具有至少95％的同源性；如具有至少96％、97％、98％、99％的同源性。

所述抗烟草青枯病菌单克隆抗体的轻链可变区的氨基酸序列具有与SEQ ID NO.1相比至少80％的同源性；更优选地，具有至少90％的同源性；最优选地，具有至少95％的同源性；如具有至少96％、97％、98％、99％的同源性。

本发明的又一具体实施方式中，所述烟草青枯病菌快速免疫检测试纸条包括：底板，所述底板上依次设置有吸水垫、检测垫、金标垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接。

其中，