[发明专利]哺乳动物冻存睾丸组织异种异位移植模型的构建方法

权利要求书

1.哺乳动物冻存睾丸组织异种异位移植模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：研究所取用荷斯坦公牛的小牛睾丸，添加冷冻保护剂后于液氮中冻存；

S2:将戊巴比妥钠麻醉剂和戊巴比妥钠粉末溶于生理盐水中，完全溶解后用滤器过滤，并在低温条件下保存；

S3：选取免疫缺陷鼠全身麻醉后仰卧保定，于阴囊处做一微型切口，牵拉睾丸至切口外，钳夹精索将睾丸摘除，镊子在酒精灯火焰上灼烧后将断端烧烙止血，精索和脂肪垫还纳腹腔后缝合切口；

S4：冻存的犊牛睾丸组织于适当温度水浴锅中复苏，并剪切成多个较小组织小块，置于冰上备用；

S5：小鼠俯卧保定后，在脊柱两侧分别做多个微型切口，将冷冻复苏后的犊牛睾丸组织小块植入切口内，并与切口一并缝合固定，每个切口注射一定量基质胶，伤口涂布碘伏消毒，放回笼内密切观察小鼠状态。

2.根据权利要求1所述的哺乳动物冻存睾丸组织异种异位移植模型的构建方法，其特征在于，根据步骤S1：研究所用的小牛睾丸取自1日龄、30日龄的荷斯坦公牛，冷冻保护剂的组成成分包括：75％基础培养基KnockoutDMEM，10％血清替代物KSR，10％二甲基亚砜DMSO，5％青-链霉素，其中青霉素浓度为10000Units/mL，链霉素浓度为10000μg/mL。

3.根据权利要求1所述的哺乳动物冻存睾丸组织异种异位移植模型的构建方法，其特征在于，根据步骤S2：采用2％戊巴比妥钠麻醉剂：2g戊巴比妥钠粉末，同时溶于100mL生理盐水中，通过0.22μm的滤器进行过滤，保存温度维持在4℃。

4.根据权利要求1所述的哺乳动物冻存睾丸组织异种异位移植模型的构建方法，其特征在于，根据步骤S3：采用5周龄BALB/c Nude免疫缺陷鼠，且免疫缺陷鼠体重14-16g，阴囊处做0.5cm切口。

5.根据权利要求1所述的哺乳动物冻存睾丸组织异种异位移植模型的构建方法，其特征在于，根据步骤S4：采用的睾丸组织于37℃水浴锅中复苏，并剪切成1-2mm³的组织小块。

6.根据权利要求1所述的哺乳动物冻存睾丸组织异种异位移植模型的构建方法，其特征在于，根据步骤S5：脊柱两侧分别做3个3mm切口，每个切口注射30μL基质胶。