[发明专利]一种检测MYL3基因突变的引物探针组合物及其应用

权利要求书

1.一种检测MYL3基因突变的引物探针组合物，其特征在于，所述检测MYL3基因突变的引物探针组合物包括检测MYL3基因突变位点c.374AC的实时荧光PCR引物和探针。

2.根据权利要求1所述的检测MYL3基因突变的引物探针组合物，其特征在于，所述实时荧光PCR引物包括SEQ ID No.1～2所示的核苷酸序列；

优选地，所述探针包括野生型MYL3的探针和突变型MYL3的探针；

优选地，所述野生型MYL3的探针包括SEQ ID No.3所示的核苷酸序列，所述突变型MYL3的探针包括SEQ ID No.4所示的核苷酸序列。

3.根据权利要求1或2所述的检测MYL3基因突变的引物探针组合物，其特征在于，所述探针为Taqman探针；

优选地，所述Taqman探针的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有淬灭基团；

优选地，所述荧光报告基团包括FAM和/或HEX；

优选地，所述淬灭基团包括MGB；

优选地，所述野生型MYL3的探针的荧光报告基团与所述突变型MYL3的探针的荧光报告基团不同；

优选地，所述野生型MYL3的探针的荧光报告基团包括FAM；

优选地，所述突变型MYL3的探针的荧光报告基团包括HEX。

4.一种检测MYL3基因突变的试剂盒，其特征在于，所述检测MYL3基因突变的试剂盒包括权利要求1～3任一项所述的检测MYL3基因突变的引物探针组合物；

优选地，所述试剂盒还包括PCR反应液和/或染料；

优选地，所述PCR反应液包括DNA聚合酶、Mg²⁺缓冲液、dNTPs和水；

优选地，所述染料包括Rox校正染料。

5.根据权利要求4所述的检测MYL3基因突变的试剂盒，其特征在于，所述检测MYL3基因突变的试剂盒还包括质控品；

优选地，所述质控品包括野生型质控品、纯合突变型质控品或杂合突变型质控品中的任意一种或至少两种的组合。

6.一种权利要求4或5所述的检测MYL3基因突变的试剂盒以非疾病诊断和/或治疗为目的的使用方法，其特征在于，所述使用方法包括：

提取待测样本的基因组，使用所述检测MYL3基因突变的试剂盒，对所述待测样本的基因组与质控品一同进行扩增，检测荧光信号，再进行分析。

7.根据权利要求6所述的使用方法，其特征在于，所述扩增的程序包括：

预变性：93～98℃，20～40s；

循环扩增：93～98℃，3～7s；55～57℃，30～40s；

延伸：70～74℃，1.5～2.5min；

优选地，所述循环扩增的次数为35～45次。

8.根据权利要求6或7所述的使用方法，其特征在于，所述分析包括：

比较所述待测样本与质控品的荧光信号及散点图，确定所述待测样本的基因型。

9.根据权利要求6～8任一项所述的使用方法，其特征在于，所述使用方法包括：

(1)提取待测样本的基因组；

(2)使用检测MYL3基因突变的试剂盒，对所述待测样本的基因组与质控品一同进行扩增，所述扩增的程序包括：

预变性：93～98℃，20～40s；

循环扩增：93～98℃，3～7s；55～57℃，30～40s；

延伸：70～74℃，1.5～2.5min；

所述循环扩增的次数为35～45次；

(3)检测荧光信号，再进行分析：

比较所述待测样本与质控品的荧光信号及散点图，确定所述待测样本的基因型。

10.权利要求1～3任一项所述的检测MYL3基因突变的引物探针组合物、权利要求4或5所述的检测MYL3基因突变的试剂盒或权利要求6～9任一项所述的检测MYL3基因突变的试剂盒以非疾病诊断和/或治疗为目的的使用方法中的任意一种或至少两种的组合在制备检测MYL3基因突变的产品中的应用。