[发明专利]一种同时测定烟草中10种Amadori化合物的方法

说明书

本发明涉及烟草成分检测领域，尤其涉及一种同时测定烟草中10种Amadori化合物的方法。所述方法采用在线SPE‑LC‑MS/MS分析方法进行测定；其中，所述在线SPE采用HySphere MM anion阴离子交换柱对样品进行在线净化。本发明的方法采用全自动固相萃取技术在线纯化烟草样品，固相萃取方式自动化操作更加简便，可实现样品高通量分析，显著提高检测效率，减少人为误差，提高检测准确性；同时，经在线SPE处理后的烟草样品，基线噪声更小，干扰峰明显减少，基质效应减小，大大降低了烟草样品对检测系统的污染，提高了检测重复性和灵敏度，延长了液质系统的使用寿命。

技术领域

本发明涉及烟草成分检测领域，尤其涉及一种同时测定烟草中10种Amadori化合物的方法。

背景技术

Amadori化合物，即1-氨基-1-脱氧酮糖，是由还原糖和氨基酸或氨基化合物经缩合、脱水、Amadori重排而得到的一类关键美拉德反应中间产物。烟叶中含有多种Amadori化合物，在卷烟燃吸过程中Amadori化合物会反应生成醛类、吡嗪类、呋喃类、呋喃酮、吡咯、吡喃酮等多种香味物质，对卷烟烟气感官质量具有重要作用，是卷烟中重要的一类前香物质。Amadori化合物的含量监控对烟叶品质评价、优化卷烟配方设计具有指导作用。因此，建立高效、准确、快速的烟草中Amadori化合物测定方法对提高卷烟质量具有重要意义。

Amadori化合物种类多、极性强、结构相似，对其进行准确定量分析难度较大。现有技术中，Amadori化合物的检测方法有氨基酸分析仪法、气相色谱法(GC)、高效液相色谱法(HPLC法)和液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法等；然而，已报道的氨基酸分析仪法存在定性不准确、分离度不够和干扰严重等问题；GC方法需要衍生化，前处理复杂，检测效率低；Amadori化合物几乎无紫外吸收，HPLC方法需要柱后衍生显色，操作繁琐，且分离效果不佳。

此外，CN103499658A公开了一种采用HPLC-MS/MS测定烟草中9种Amadori化合物的方法，该方法采用多步环己烷液液萃取、甲醇-水浓缩蒸干等样品进行净化处理，样品前处理步骤繁琐。CN106353434A公开了一种采用HPLC-MS/MS测定烟草中10种的方法，该方法未对提取甲醇水提取溶液进行有效的净化，部分成分存在基质干扰。因此，开发一种快速、高效、准确的同时测定烟草中多种Amadori化合物的分析方法已成为一个迫切解决的问题。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种同时测定烟草中10种Amadori化合物的方法，将烟叶或烟丝样品粉碎后，经纯水超声萃取、稀释后直接进行在线SPE-LC-MS/MS分析，该方法可快速、高效、准确的同时测定烟草中10种Amadori化合物。

具体地，本发明提供以下技术方案：

本发明提供一种同时测定烟草中10种Amadori化合物的方法，采用在线SPE-LC-MS/MS(在线固相萃取-液相色谱-串联质谱)分析方法进行测定；

其中，所述在线SPE采用HySphere MM anion阴离子交换柱对样品进行在线净化。

本发明发现，在线SPE采用HySphere MM anion阴离子交换柱对样品进行在线净化，为后续分离10种Amadori化合物奠定了基础，进而有望实现烟草中10种Amadori化合物的准确测定。

作为上述技术方案的优选，所述在线SPE包括活化、平衡、上样、洗涤和洗脱的步骤；具体而言，所述HySphere MM anion阴离子交换柱采用0.8～2mL甲醇、以2～5mL/min的流速进行活化，采用0.8～2mL 2％的氨水、以2～5mL/min的流速进行平衡，采用0.4～0.8mL2％的氨水、以0.4～0.8mL/min的流速进行上样，采用0.5～1.0mL 2％的氨水，以1～2mL/min的流速进行洗涤，洗脱时间为8～15min。