[发明专利]一种同时测定烟草中10种Amadori化合物的方法

权利要求书

1.一种同时测定烟草中10种Amadori化合物的方法，其特征在于，采用在线SPE-LC-MS/MS分析方法进行测定；

其中，所述在线SPE采用HySphere MM anion阴离子交换柱对样品进行在线净化；所述Amadori化合物包括葡萄糖胺、果糖-苯丙氨酸、果糖-天冬酰胺、果糖-亮氨酸、果糖-异亮氨酸、果糖-色氨酸、果糖-缬氨酸、果糖-谷氨酸、果糖-脯氨酸、果糖-丙氨酸；

所述HySphere MM anion阴离子交换柱采用0.8~2 mL甲醇、以2~5 mL/min的流速进行活化；采用0.8~2 mL 2%的氨水、以2~5 mL/min的流速进行平衡；采用0.4~0.8 mL 2%的氨水、以0.4~0.8 mL/min的流速进行上样；采用0.5~1.0 mL 2%的氨水，以1~2 mL/min的流速进行洗涤，洗脱时间为8~15 min；

LC-MS/MS条件如下：

色谱柱：五氟苯基丙基硅胶柱；色谱柱的规格为Discovery HS F5-3，150 mm×2.1mm，3.0μm；

流动相A：0.05~0.2%的甲酸水溶液；

流动相B：乙腈；

流速：0.2~0.4 mL/min；

柱温：40~60℃；

进样量为：5~20μL；

采用梯度洗脱，以所述流动相的总体积为100%计，

在第0~7.0 min，所述流动相A的体积由100%递减为90%，所述流动相B的体积由0%递增为10%；

在第7.1~11.0 min，所述流动相A的体积由90%递减为40%，所述流动相B的体积由10%递增为60%；

在第11.0~13.0 min，所述流动相A的体积为40%，所述流动相B的体积为60%；

在第13.1~15.0 min，所述流动相A的体积为5%，所述流动相B的体积为95%；

在第15.1~18.0 min，所述流动相A的体积为100%，所述流动相B的体积为0%。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述HySphere MM anion阴离子交换柱采用1 mL甲醇、以5 mL/min的流速进行活化，采用1 mL 2%的氨水、以5 mL/min的流速进行平衡，采用0.5 mL 2%的氨水、以0.8 mL/min的流速进行上样，采用0.8 mL 2%的氨水，以2 mL/min的流速进行洗涤，洗脱时间为9 min。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相A为0.1%的甲酸水溶液；流速为0.3 mL/min；柱温为55℃；进样量为10 μL。

4.根据权利要求1~3任一项所述的方法，其特征在于，所述LC-MS/MS分析采用电喷雾离子源正离子扫描模式，检测方式采用多反应监测；

其中，电喷雾电压为4800~5500 V；雾化气、辅助加热气、气帘气、碰撞气为氮气，气体流量分别为50~68 psi、50~70 psi、18~30 psi、6~10 psi；离子源温度为480~580℃；驻留时间为45~100 ms。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，电喷雾电压为5500 V；雾化气流量为60psi；辅助加热气流量为70 psi；气帘气流量为20 psi；碰撞气流量为7 psi；离子源温度为550℃；驻留时间为50 ms。

6.根据权利要求1~3任一项所述的方法，其特征在于，还包括预处理的步骤，所述预处理包括：

步骤（1）：将烟叶或烟丝在35~45℃下烘烤1~2 h后粉碎，过40目筛网；称取0.2~1 g烟末，加入20~60 mL纯水，超声萃取20~60 min；

步骤（2）：萃取液经0.22μm针式滤器过滤后，用纯水稀释3~15倍后，进行在线SPE-LC-MS/MS分析。