[发明专利]一种用于口腔脱落细胞直接PCR扩增的预处理方法及试剂盒

说明书

本发明提供了一种对口腔样本直接进行PCR扩增的方法，所述方法包括：(1)使用一种口腔采样拭子进行样本采集；和(2)直接以所获得的样本作为模板进行PCR扩增；所述口腔采样拭子包括手柄和采样拭子头，所述采样拭子头包括采样头本体，以及所述采样头本体上的用于增加表面积的凸起和/或凹陷，其中所述采样头本体和所述凸起和/或凹陷的外表未覆盖其他材料。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地说涉及一种可对口腔脱落细胞直接进行PCR扩增的预处理方法及试剂盒。

背景技术

对于分子诊断，最常用的临床检测方法是荧光定量PCR法。PCR(Polymerase ChainReaction，聚合酶链式反应)是一种在生物体外放大扩增特定DNA(deoxyribonucleicacid，脱氧核糖核酸)片段的技术。PCR在扩增DNA时一般需要经过高温解链反应、退火反应及延伸反应三个步骤，经过上述三个步骤后初始DNA分子数量增加一倍，此时为一个循环；倍增后的DNA分子继而成为下一个循环的模板，如此循环倍增下去，经过30-40个循环后，DNA分子数目将放大至初始值的近10⁹-10¹⁰倍。由此，针对于分析和检验的目的，PCR能够将作为分析物的DNA分子进行特异性的大规模放大，因此，PCR技术能够用于传染病、遗传性疾病及肿瘤等的早期诊断，同时，产前检查及法医鉴定中得到越来越广泛的应用。基于PCR技术的分子检测方法通常需要经历样本处理、核酸提取以及PCR反应体系构建、PCR扩增反应以及信号检测等过程。

荧光定量PCR方法一般分为探针法和染料法。探针法是PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；刚开始时,探针结合在DNA任意一条单链上；PCR扩增时，Taq酶的5'端-3'端外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。染料法是使用能与核酸进行结合的荧光染料。这些染料可以结合到双链DNA上面，当体系中的模板被扩增时，荧光染料可以有效结合到新合成的双链上面，随着PCR的进行，结合的荧光染料越来越多，被仪器检测到的荧光信号越来越强，从而达到定量的目的。

PCR反应需要模板，常规的口腔脱落细胞模板对样本进行提取后获得的。样本的提取过程大多数繁琐费时，有研究者通过配方调整，实现了简易提取。但是由于简易提取并不能完全去除样本中抑制PCR反应的杂质，因此检出率偏低。

此外，对于目前经常使用的采样工具，如棉拭子、植绒拭子等，在采样过程中会采集到大量的无用蛋白和杂质，影响样本质量。如果使用这样的采样工具，由于样本杂质过多，至少需要简易的样本处理过程。

因此，仍然迫切需要更有效的采样工具以及更简单易行的方法，来进行PCR检测。

发明内容

第一方面，本发明提供了一种口腔样本采集的方法，所述方法包括使用一种口腔采样拭子进行样本采集，所述口腔采样拭子包括手柄和采样拭子头，所述采样拭子头包括采样头本体，以及所述采样头本体上的用于增加表面积的凸起和/或凹陷，其中所述采样头本体和所述凸起和/或凹陷的外表未覆盖其他材料。

第二方面，本发明提供了一种对口腔样本直接进行PCR扩增的方法，所述方法包括：(1)使用一种口腔采样拭子进行样本采集；和(2)直接以所获得的样本作为模板进行PCR扩增；其中所述口腔采样拭子包括手柄和采样拭子头，所述采样拭子头包括采样头本体，以及所述采样头本体上的用于增加表面积的凸起和/或凹陷，其中所述采样头本体和所述凸起和/或凹陷的外表未覆盖其他材料。