[发明专利]一种检测LMNA基因突变的引物探针组合物及其应用

说明书

本发明提供了一种检测LMNA基因突变的引物探针组合物及其应用，所述检测LMNA基因突变的引物探针组合物包括检测LMNA基因突变位点c.562CG的实时荧光PCR引物和探针；所述实时荧光PCR引物包括SEQ ID No.1～2所示的核苷酸序列；所述探针包括野生型LMNA的探针和突变型LMNA的探针；所述野生型LMNA的探针包括SEQ ID No.3所示的核苷酸序列，所述突变型LMNA的探针包括SEQ ID No.4所示的核苷酸序列。本发明还提供了一种检测LMNA基因突变的试剂盒和所述试剂盒以非疾病诊断和/或治疗为目的的使用方法。所述引物探针组合物灵敏性高，特异性好，应用价值高。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种检测LMNA基因突变的引物探针组合物及其应用。

背景技术

扩张型心肌病(Dilated cardiomyopathy，DCM)是一种遗传异质性心脏疾病，主要临床表现为单侧或双侧心室扩张和收缩功能减弱，病理特征为心肌壁变薄、心室腔显著扩大并伴有血栓的形成，是导致心衰的最常见原因。该病发病率不低于1/2500，约30％～50％的患者为家族性遗传，称为家族性扩张型心肌病(Familial dilated cardiomyopathy，FDCM)。该病的遗传模式也有多种，常染色体显性遗传、常染色体隐形遗传、X连锁遗传和线粒体DNA遗传，其中最常见的是常染色体显性遗传和隐性遗传。

到目前为止，已经发现多个基因的相关位点突变可以引发DCM，主要致病基因编码的蛋白质有：β-肌球蛋白重链(MYH7)、心肌肌球蛋白结合蛋白C3(MYBPC3)、心肌肌钙蛋白T(TNNT2)、核纤层蛋白(LMNA)、肌钙蛋白I(TNNI3)、α-原肌球蛋白(TPM1)、α-心脏肌动蛋白(ACTC)、受磷蛋白(PLN)和肌营养不良蛋白(DMD)等。LMNA位于核膜内，由一个二维的矩阵蛋白构成，通过结蛋白(desmin)和粗肌丝及细肌丝发生作用。编码核纤层蛋白的LMNA基因定位于1q22，该基因变异不仅能导致营养不良症和家族性部分脂肪酸代谢障碍等疾病，还会引发骨骼肌和心脏传导阻塞。此外，众多证据表明，当LMNA基因突变后，LMNA基因介导的AKT-mTOR信号通路被激活，导致心肌细胞代谢紊乱、自噬功能受损和细胞供能不足，从而产生扩张型心肌病。

DCM死亡率较高，5年内的死亡率约为5％～15％，除心脏移植外，没有彻底的治疗方法，给家庭和社会带来了巨大的经济负担和沉重的精神压力。因此，对DCM的预防是关键。对DCM患者进行基因检测和家族筛查能够为临床诊断提供重要的指导作用，并且可以在症状发生前发现潜在的患病个体，进而对患病人群进行风险评估、危险分层和临床干预，最终降低患病人群的发病率或提高其生存率。

目前，遗传疾病基因突变的检测方法较多，如限制性片段长度多态性、SNP shot多重PCR技术、高分辨率溶解曲线分析、PCR扩增直接进行毛细管电泳测序和下一代测序技术等。上方法各有优缺点，毛细管电泳技术是基因突变检测的金标准，但因其对设备的要求高、费时费力、价格昂贵等缺点，很难从实验室普及到临床。CN101134960A公开了一种扩张型心肌病的LMNA基因突变及其检测方法，该方法利用普通PCR扩增技术结合Sanger测序技术，对LMNA基因877位碱基发生C→T杂合突变进行测序。该方法较为传统，过程繁琐，需要用到Sanger测序技术，耗时较长，且价格十分昂贵，不宜推广。

导致DCM发病的基因和突变位点较多，早期的分子检测和预防尤为关键。因此，如何建立一种简便、快速、经济和准确的DCM突变筛查方法，为DCM的预防、辅助临床诊断和预后评估提供技术支持，已成为亟待解决的问题。

发明内容

针对现有技术的不足和实际需求，本发明提供一种检测LMNA基因突变的引物探针组合物及其应用，通过使用不同的荧光报告基团分别标记野生型LMNA的探针和突变型LMNA的探针，再结合质控品的检测结果，可以准确分析样本LMNA基因的新突变位点c.562CG的突变情况，结果准确，耗时较短，具有极高的应用价值。

为达此目的，本发明采用如下技术方案：