[发明专利]一种再生有色毛发注射剂及其制备方法

说明书

本发明公开了一种再生有色毛发注射剂及其制备方法，该方法从头皮组织中分离表皮干细胞、黑色素细胞和真皮成纤维细胞，将黑色素细胞和真皮成纤维细胞形成的细胞团和表皮干细胞按一定比例混合后获得再生毛发注射剂，将注射剂注射到头发再生部位既可以逐渐再生出有色毛发，该方法简单，可以再生出毛发，且再生的毛发是有颜色的，颜色可以通过调整不同细胞比例进行控制。

技术领域

本发明涉及一种再生有色毛发注射剂及其制备方法，属于细胞工程领域。

背景技术

脱发和白发症都是是一种常见的疾病，影响男性、女性和儿童。目前治疗脱发主要依靠药物和自体毛发移植，但这两种方法都存在一些困难，如药物作用有限，无法增加头皮的毛发数量等。胚胎发育和出生后毛发循环过程中毛囊的形成受上皮来源的毛囊干细胞(如毛囊上皮干细胞、膨大上皮干细胞)和间充质来源的毛囊干细胞(如真皮乳头细胞、毛囊真皮细胞)之间一系列相互作用的调控。维持这种能力的方法已经被研究过，包括使用生长因子和信号分子。例如，损失成纤维细胞生长因子-2、Wnt和骨形态发生蛋白可减轻DP细胞的毛发诱导能力。另一种方法是在移植前制造3D组织，在悬滴或非细胞黏附培养条件下，DP细胞形成聚集体，增强了DP特异性标志物的表达。

而白发症可分为生理性白发和病理性白发2种，无论发生机制如何，从根本上都是由毛囊内黑色素细胞谱系平衡的紊乱所引起的。在毛发着色的过程中，黑色素细胞所分泌的黑色素颗粒具有直接作用；一旦被破坏，后续的其他子代黑色素细胞最终都将丧失功能。西医目前对本病尚无特效疗法，而染发又能诱发各种疾病，如接触性皮炎、白血病、骨质疏松甚至癌变等。相比之下，中医药治疗本病有着明显的优势，可采用中药内服、外洗、针灸推拿以及药膳等治疗方法，值得广泛应用，但该方法需要长期坚持且作用效果因人而异。

发明内容

本发明克服了上述现有技术的不足，提供一种再生有色毛发注射剂及其制备方法，该方法从头皮组织中分离表皮干细胞、黑色素细胞和真皮成纤维细胞，将黑色素细胞和真皮成纤维细胞形成的细胞团和表皮干细胞按一定比例混合后获得再生毛发注射剂，将注射剂注射到头发再生部位即可逐渐再生出有色毛发，该方法简单，可以再生出毛发，且再生的毛发是有颜色的，颜色可以通过调整不同细胞比例进行控制。

一种再生有色毛发注射剂的制备方法，包括如下步骤：

1)获取头皮组织，消化后分离出原代表皮干细胞、原代黑色素细胞和原代真皮成纤维细胞；

2)将步骤1)中获得的原代表皮干细胞传代培养，收集P3-P5代的表皮干细胞接入细胞培养瓶中；

3)黑色素细胞和真皮成纤维细胞按照数量比1：(5-20)的比例混合，加入多功能无血清细胞培养基进行重悬，重悬后接种于低吸附培养板中，培养2-3天，形成黑色素细胞和真皮成纤维细胞的3D细胞团，收集3D细胞团悬液离心，保留上清液和离心后的3D细胞团；

4)步骤2)收集的表皮干细胞和步骤3)中离心后的3D细胞团按照数量比(2:1)-(1:5)的比例混合，使用步骤3)中获得的上清液重悬混合后的细胞；

5)将步骤4)获得的混合后的细胞用不含双抗的DMEM清洗，离心后弃上清，沉淀用的步骤3)中收集的上清液重悬，即可获得再生有色毛发注射液。

进一步的，步骤2)中所述的细胞培养瓶中加入8～12mL皮肤表皮细胞培养基，P3-P5代的表皮干细胞按照120-150万/T75瓶接种到细胞培养瓶中，所述皮肤表皮细胞培养基为专利号为按照专利201610473310.4制备的培养基。

进一步的，步骤3)中所述的多功能无血清细胞培养基为使用专利号为201610473348.1的专利中的方法制备的培养基。

进一步的，步骤5)中所述的离心的条件为600-1000rpm离心5min。

进一步的，步骤1)中所述分离出表皮干细胞、黑色素细胞和真皮成纤维细胞的方法，包括如下步骤：