[发明专利]解淀粉芽孢杆菌脲酶在食品级枯草芽孢杆菌中的重组表达

权利要求书

1.编码脲酶的基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.5或SEQ IDNO.6所示。

2.表达权利要求1所述基因的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，宿主选自：B.subtilisWB600、B.subtilis WB700、B.subtilis WB800或B.subtilis WB168，表达载体选自：pP43NMK、pHT43、pMA5或pTTB。

3.一种构建表达脲酶基因的重组枯草芽孢杆菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将来源于Bacillus amyloliquefaciens IT-45的脲酶基因簇Ba-urease序列进行枯草芽孢杆菌密码子优化、核糖体结合位点优化，获得如SEQ ID NO.5所示的脲酶基因Ba-urease-1；

(2)在如SEQ ID NO.5所示的脲酶基因Ba-urease-1的基础上，将ureC移置至ureA和ureB的上游，从而获得序列如SEQ ID NO.6所示的脲酶基因Ba-urease-2，将其与表达载体pP43NMK连接，构建脲酶表达载体pP43NMK-Ure-2；

(3)将pP43NMK-Ure-2转化至B.subtilis WB600中，获得重组表达菌株B.subtilisWB600/pP43NMK-Ure-2。

4.一种表达脲酶基因的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，以B.subtilis WB600为宿主，以pP43NMK载体表达SEQ ID NO.6所示的脲酶基因。

5.应用权利要求4所述重组枯草芽孢杆菌制备脲酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：

挑取重组枯草芽孢杆菌单菌落，接种于含有50μg/mL卡那霉素的5mL LB液体培养基中，在37℃、200r/min的摇床中振荡培养10h；

按5％的接种体积分数，转接于含有50μg/mL卡那霉素、4mmol/L Ni²⁺的100mL TB液体培养基中，在37℃、200r/min的摇床中振荡培养8h，于28℃诱导培养42h。

6.携带权利要求1所述基因的载体。

7.解淀粉芽孢杆菌脲酶基因的食品级表达方法，其特征在于，对解淀粉芽孢杆菌IT-45来源的脲酶基因簇进行密码子优化、核糖体结合位点优化重构以及将结构基因ureC调整至ureA、ureB上游，然后与表达载体连接，并转化至食品级表达宿主，培养重组宿主使之表达脲酶。

8.权利要求1所述基因编码的脲酶。

9.权利要求8所述脲酶在降解尿素中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，利用脲酶来降低或消除发酵食品和酒精饮料中的尿素含量以降低氨基甲酸乙酯。