[发明专利]一种制备畜禽软骨胶原蛋白多肽的方法

说明书

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种高效制备畜禽软骨胶原蛋白多肽的方法。本发明所述畜禽软骨胶原蛋白的制备方法，在传统制备软骨胶原蛋白方法的基础上，进一步通过对酶解过程中提取压力的调整控制，通过微负压和常压提取交替进行的方式，可有效提高胶原蛋白的提取效率，进一步提高了软骨废料的应用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种高效制备畜禽软骨胶原蛋白多肽的方法。

背景技术

我国畜牧业大国，尤其是随着畜禽养殖的迅猛发展，副产物随之大量增加，这些副产物的深加工必须跟上养殖业的发展步伐，才能提高畜禽养殖的经济效益，减少资源浪费，促进产业持续、快速、健康、稳定地发展。因此，加强畜禽副产物的开发利用具有十分重要的意义。传统畜禽副产物的开发利用主要包括对畜禽的血液、骨、内脏、皮毛、蹄等的综合加工利用，而如何发展更多具有科技含量高、附加值高的畜禽副产品利用项目，己成为畜禽副产品研究、开发的重点。

软骨尤其是动物软骨是各类肉制品加工产生的下脚料，不仅资源十分丰富且种类较多。据报道，动物软骨中富含硫酸软骨素和胶原蛋白等活性成分，该类生物活性大分子被广泛应用于医药、食品和化妆品等领域。硫酸软骨素(Chondroitin Sulfate，CS)是由D-葡萄糖醛酸和N-乙酰氨基半乳糖构成的重复二糖单位组成的酸性黏多糖，临床上主要用于防治关节炎、治疗神经痛、关节痛、动脉硬化症、听觉障碍及肝炎等疾病，对冠心病、风湿性炎症及伤口愈合等也具有良好的疗效。胶原蛋白是动物体内含量最多、分布最广的蛋白质，广泛存在于动物的皮肤、骨、牙齿、肌腱韧带和血管中。国内外研究表明，胶原蛋白及水解所得的胶原蛋白多肽在促进身体健康、提高免疫力及延缓衰老等方面具有重要作用。目前，国内生产企业大多以软骨为原料提取和分离硫酸软骨素，而软骨中占总蛋白90％的胶原蛋白则被酶解和变性，只能用作蛋白饲料或随废水排放，产品附加值较低，未能实现软骨资源的高值化利用。

畜禽动物中，畜禽骨骼由骨膜、骨质、骨髓构成，是蛋白质和钙质组成的网状结构，再构成管状，管内充满了含多种营养物质的骨髓，如构成脑组织的磷脂及防止老化的骨胶原、软骨素等，鲜骨中则含有蛋白质、脂肪、矿物质(如钙、磷、铁等)、骨胶原、软骨素以及维生素A、Bl、B2等。尤其是，畜骨蛋白是较为全价的可溶性蛋白质，其主要成分为胶原蛋白，生物学效价较高。传统的畜骨中的蛋白质提取主要是指对骨胶的提取，即粉碎后的畜骨经洗涤脱脂、加酸去杂、浸泡熬煮、浓缩成胶冻状的物质，以获得所需的骨蛋白。

如中国专利CN106244659A公开了一种制备畜禽软骨胶原蛋白的方法，其以新鲜软骨为原料，经脱脂、脱钙、除杂等处理制得胶原蛋白，再经醋酸胃蛋白酶消化、盐析及碱性蛋白酶解处理，经凝胶分离技术分离纯化得到胶原蛋白多肽。该工艺虽然实现了软骨副产物的深度开发，但整个工艺中胶原蛋白的提取效率以及胶原蛋白多肽的提取效率却并不理想。

发明内容

为此，本发明所要解决的技术问题在于提供一种高效制备畜禽软骨胶原蛋白多肽的方法，以解决现有技术中畜禽软骨胶原蛋白多肽提取效率不理想的问题。

为解决上述技术问题，本发明所述的一种高效制备畜禽软骨胶原蛋白多肽的方法，包括如下步骤：

(1)取除杂处理后的新鲜软骨进行预处理，备用；

(2)将预处理后的软骨加入酸性蛋白酶液，于微负压和常压交替状态下进行酶解处理，固液分离并收集上清液，经盐析处理，收集得到的絮状白色沉淀物；

(3)将得到的沉淀物配制得到溶液，并加入碱性蛋白酶进行酶解处理，收集酶解液；

(4)将所得酶解液过滤后采用凝胶分离技术进行分离提纯，收集出现蛋白质峰的洗脱液，经冷冻干燥，即得。

具体的，所述步骤(2)中，所述酸性蛋白酶液包括浓度为0.3-0.8mol/L的胃蛋白酶液，并以醋酸调节酶液pH值为2.5-3.0。