[发明专利]一种制备畜禽软骨胶原蛋白多肽的方法

权利要求书

1.一种制备畜禽软骨胶原蛋白多肽的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）取除杂处理后的新鲜软骨进行预处理，备用；

（2）将预处理后的软骨加入酸性蛋白酶液，于微负压和常压交替状态下进行酶解处理，固液分离并收集上清液，经盐析处理，收集得到的絮状白色沉淀物；

（3）将得到的沉淀物配制得到溶液，并加入碱性蛋白酶进行酶解处理，收集酶解液；

（4）将所得酶解液过滤后采用凝胶分离技术进行分离提纯，收集出现蛋白质峰的洗脱液，经冷冻干燥，即得，其中

所述微负压条件为-0.1MPa，并且所述微负压与常压的交替时间为1-4h；其中

所述步骤（2）中，所述酸性蛋白酶液包括浓度为0.3-0.8mol/L的胃蛋白酶液，并以醋酸调节酶液pH值为2.5-3.0，所述酶解处理步骤的温度为2-6℃，酶解时间为20-36h；并且

所述步骤（3）中，所述酶解处理步骤的温度为60-65℃，酶解时间为2-3h。

2.根据权利要求1所述制备畜禽软骨胶原蛋白多肽的方法，其特征在于，所述步骤（2）中，所述酸性蛋白酶液中还包括浓度为0.05-0.1mol/L的氯化胆碱。

3.根据权利要求1或2所述制备畜禽软骨胶原蛋白多肽的方法，其特征在于，所述步骤（3）中，所述碱性蛋白酶的质量浓度为1-2wt%，pH值为9-11。

4.根据权利要求1或2所述制备畜禽软骨胶原蛋白多肽的方法，其特征在于，所述步骤（4）中，所述分离提纯步骤包括：将预处理过的SepHadex-G50装入层析柱，用经过超声脱气后的流速为0.9m1/min的超纯水洗脱压实，将酶解液经过过滤器后装入层析柱中以0.5m1/min的流速在室温下进行分离提纯，收集出现蛋白质峰的洗脱液。

5.根据权利要求1或2所述制备畜禽软骨胶原蛋白多肽的方法，其特征在于，所述步骤（1）中，所述预处理步骤包括脱脂、脱钙、去除糖蛋白杂质的步骤。