[发明专利]一种基于Au@Pt酶的免疫层析试纸条及其制备方法

说明书

本发明公开了一种基于Au@Pt酶的免疫层析试纸条及其制备方法,包括以下步骤：S1：制备Au@Pt标记单克隆抗体的溶液，Au@Pt标记单克隆抗体为Au@Pt‑mAb；S2:在硝酸纤维素膜上制备检测线T线和控制线C线；S3:将S2中的硝酸纤维素膜与样品垫玻、结合垫和吸水垫组装成整条试纸，然后将组装好的试纸切成试纸条。简便、灵敏、快速、实时的免疫层析法检测谷物中的呕吐毒素(DON)和玉米赤霉烯酮(ZEN)，利用Au@Pt酶本身黑色的特性，实现了对呕吐毒素和玉米赤霉烯酮(ZEN)的可视化检测。

技术领域

本发明涉及免疫检测领域。更具体地，涉及一种基于Au@Pt酶的免疫层析试纸条及其制备方法。

背景技术

呕吐毒素(DON)和玉米赤霉烯酮(ZEN)广泛存在于谷物粮食及环境水体中，具有很强的毒性，对人体构成极大的威胁以及对农作物产量、水体环境均有不同程度的影响。因此建立简便、快速、灵敏的检测方法同时检测这两种毒素具有重要意义。

传统的胶体金免疫层析试纸条主要利用了金颗粒独有的颜色特性实现定性或半定量的检测。此方法具备方便快速，成本低，应用范围广等特点。然而金纳米颗粒在检测的过程中容易受到环境因素的影响，如在强酸、强碱和盐浓度高的环境中容易聚集沉淀，影响检测结果。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服上述现有技术的缺陷和不足，开发一种简便、灵敏、快速、实时的免疫层析法检测谷物中的呕吐毒素(DON)和玉米赤霉烯酮(ZEN)，利用Au@Pt酶本身黑色的特性，实现了对呕吐毒素和玉米赤霉烯酮(ZEN)的可视化检测。

本发明的目的是提供一种基于Au@Pt的侧流免疫层析试纸条制备方法,包括以下步骤：

S1：制备Au@Pt标记单克隆抗体的溶液，Au@Pt标记单克隆抗体为Au@Pt-mAb；

S2:在硝酸纤维素膜上制备检测线T线和控制线C线；

S3:将S2中的硝酸纤维素膜与样品垫玻、结合垫和吸水垫组装成整条试纸，然后将组装好的试纸切成试纸条。

在本发明的一个较佳实施例中，进一步包括，步骤S1包括：

S11先制备Au@Pt纳米酶溶液；

S12取两个离心管，分别加入1mLS101中制备的Au@Pt纳米酶溶液，然后0.2mol/L的K₂CO₃溶液调节胶体金溶液至pH 8.5左右；

S13在两个离心管中分别加入1.3μL 1mg/mL的DON单克隆抗体、2.3μL 0.5mg/mL的ZEN单克隆抗体，室温下反应30min，使抗体标记在胶体金颗粒上；

S14向离心管中各加入牛血清白蛋白溶液，封闭30min，离心去除上清液；

S15将S104中获得的沉淀液重溶于Tris缓冲液，分别得到稳定的Au@Pt标记的DON单克隆抗体和Au@Pt标记的ZEN单克隆抗体。

在本发明的一个较佳实施例中，进一步包括，步骤S11制备Au@Pt纳米酶溶液的步骤包括：

S111取3mL的K₂PtCl₆和3mL的HAuCl₄·4H₂O于酸化后的玻璃瓶中,称取0.06g的Pluronic F127加入混合溶液中，并超声溶解；

S112在超声状态下加入6mL的抗坏血酸，继续超声反应15min,超声完成后置于磁力搅拌器上，室温搅拌20-24h；

S113将获得的产物10000rpm下离心20min，除去多余的Pluronic F127，并加入丙酮和水进行反复洗涤，洗涤4次，最后加入双蒸水并超声分散，获得Au@Pt纳米酶溶液。