[发明专利]一种预防冠状病毒感染的益生酸奶及制备方法

权利要求书

1.一种预防冠状病毒感染的益生酸奶及制备方法，其特征在于，包括：(1)敲除益生发酵菌嗜酸乳杆菌的半乳糖苷酶基因，构建以半乳糖苷酶为筛选标记的半乳糖苷酶缺陷型嗜酸乳杆菌突变株；(2)将乳酸菌质粒的复制子、启动子、半乳糖苷酶基因以及合成的多克隆位点克隆至基因载体，构建半乳糖苷酶互补型载体；(3)根据GenBank人ACE2 mRNA序列设计引物，添加酶切位点，经PCR扩增获得ACE2基因，进而经酶切和连接将ACE2基因克隆至半乳糖苷酶互补型载体，获得同时表达ACE2基因和半乳糖苷酶基因的重组载体；(4)将所述重组载体转化突变株，获得双表达ACE2和半乳糖苷酶的无抗生素抗性基因的重组嗜酸乳杆菌；(5)将重组嗜酸乳杆菌包被成抵抗胃液的微胶囊；(6)以重组嗜酸乳杆菌或重组嗜酸乳杆菌微胶囊替代现有技术的嗜酸乳杆菌发酵菌，配制抗冠状病毒感染的发酵乳制品；(7)食用发酵乳制品后，其中的重组嗜酸乳杆菌定植于肠道繁殖，并持续表达ACE2蛋白，随后ACE2蛋白刺激宿主产生抗-ACE2，其中ACE2蛋白起封闭冠状病毒受体结合区S1-RBD的作用，抗-ACE2起封闭宿主细胞表面冠状病毒受体ACE2的作用，表达在益生菌表面的ACE2可与宿主细胞竞争吸附冠状病毒，从而阻断冠状病毒通过S1-RBD与ACE2受体的结合而感染宿主。

2.根据权利要求1所述的一种预防冠状病毒感染的益生酸奶及制备方法，其特征在于，所述益生发酵菌包括乳球菌、粪链球菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、拉曼乳杆菌、嗜酸乳杆菌、双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、酵母菌、沙门氏菌、伤寒沙门氏菌Ty21a血清型变异株。

3.根据权利要求1、2所述的一种预防冠状病毒感染的益生酸奶及制备方法，其特征在于，所述益生发酵菌或载体菌是指嗜酸乳杆菌。

4.根据权利要求1所述的一种预防冠状病毒感染的益生酸奶及制备方法，其特征在于，所述载体包括细胞载体、纳米载体、人工载体、pNZ8148、pLEISS、pMG36e、pBBR1MCS-5、pBBR1MCS-6、pRV610、pLEM415、pHY300PLK、NZ9000、MG1363、pBARGPE1、pNZ8149、pAN7-1、pBHt1、pVE5523、pPG611.1、pPG612.1、pMA5、pHCMC05、pGFP22、pGFP315、pHP13、pHP13-43、pHY-43、pWB980、pAOX1、MG1363、pNZ8148、NZ9000、pNZ9530、pMG36e、pKLAC1、GG799、pYD1、EBY100、pYES2、pYES2-flag、pYES2NTA、NTB、NTC、pYES3CT、pYIP5、pYRP7、pADH2、pRSH41、pDC315、pDF15、pUG6、pESC-His、BFD14、BFD15、pDNR1、p334、pDR195、pRS316，pRS316HA、YEplac112、YCplac33、YEplac195、YEpLac181、YIP211、pYX212、pYX212-VHB、pPG1或pPG2。

5.根据权利要求1、4所述的一种预防冠状病毒感染的益生酸奶及制备方法，其特征在于，所述载体是指PMD-19-T、PUC-19、PBR322或pPlac。

6.根据权利要求1所述的一种预防冠状病毒感染的益生酸奶及制备方法，其特征在于，所述乳制品包括酸奶、胶囊、片剂、粉剂、口服液、保健品。

7.根据权利要求1所述的一种预防冠状病毒感染的益生酸奶及制备方法，其特征在于，所述重组嗜酸乳杆菌表达ACE2蛋白包括以S1-RBD基因和/或IL-10基因替换ACE2基因，然后与胞外锚定质粒或分泌型质粒构建重组质粒，进而转化嗜酸乳杆菌益生菌，使重组S1-RBD和/或IL-10基因的益生菌持续表达S1-RBD和/或IL-10，起抗冠状病毒感染作用。